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时间:2018-11-26
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1、林氏咽宁散体外抗金黄色葡萄球菌实验【关键词】林氏咽宁散;,,金黄色葡萄球菌;,,抗菌实验 摘要:目的探讨林氏咽宁散体外对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。方法以微生物试验琼脂平皿法、液体试管法观察其抗菌作用。结果对金黄色葡萄球菌有一定的抑菌作用。琼脂平皿法最低抑菌浓度(MIC)为0.1g/ml,液体试管法最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)均为0.025g/ml。结论实验结果表明,林氏咽宁散体外抗菌活性测定显示,对金黄色葡萄球菌有一定的抗菌作用,与其相关的临床功能主治相符,为其临床应用提供了一定的实验基础。 关
2、键词:林氏咽宁散;金黄色葡萄球菌;抗菌实验 林氏咽宁散系采用著名老中医祖传经验方,运用先进工艺制成的纯中药散剂。主要有凤凰衣、藏青果、薄荷叶、人工牛黄、珍珠粉、冰片、黄柏等10味中药组成。用于治疗急慢性咽炎等。本实验对林氏咽宁散进行体外抗金葡菌实验,为临床应用提供一定的实验基础。 1材料 1.1药品林氏咽宁散(常州市中西医结合医院,批号050829,钴60辐射灭菌),青霉素-V钾片0.25g(SandozGmbH,Kundl-Austria,批号133590),锡类散(江苏天士力制药有限公司,批号0502002
3、)。 1.2菌种金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus〔CMCC(B)26003〕(中国药品生物制品检定所)。 1.3培养基〔1〕 1.3.1Mueller-Hinton(M-H)肉汤培养基成分:牛肉浸膏3g,纯水1000ml,可溶性淀粉1.5g,酪蛋白水解物17.5g。制法:将上述各成分混合,摇匀,调pH至7.4,分装,灭菌,备用。 1.3.2Mueller-Hinton琼脂(MHA)培养基成分:M-H肉汤1000ml,琼脂17g。制法:将琼脂加入M-H肉汤内,加热溶解,分装,灭菌,备用。
4、 2方法与结果 2.1最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC)的测定 2.1.1平皿二倍稀释法〔1〕采用琼脂稀释法,用Mueller-Hinton琼脂(MHA)培养基对林氏咽宁散进行定量抗金葡菌试验。 2.1.1.1药液稀释称取林氏咽宁散6g,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液30ml振摇,混匀,即为0.2g/ml供试液。取青霉素-V钾片1片,研磨,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液溶解并稀释至0.000025g/ml(相当于青霉素V42.375u/ml)的溶液,作为药物对照液。取锡类散3g,加pH7
5、.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液15ml振摇,混匀,即为0.2g/ml的对照液。取无菌空试管6支,第1管中放入林氏咽宁散供试液(0.2g/ml),第2~6管中分别加5mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,于第1管中取出5ml放入第2管中,混匀,即为0.1g/ml的供试液,同法从第2管取出5ml放入第3管,如此连续稀释至第6管,供试溶液的含药浓度依次为:0.2,0.1,0.05,0.025,0.0125,0.00625g/ml。取无菌空试管6支,同法将锡类散依次稀释成0.2,0.1,0.05,0.025,0.0125,0
6、.00625g/ml的溶液。 2.1.1.2含药平皿制备分别取上述供试液与对照液1ml加入无菌平皿中,然后分别加入相同量的Mueller-Hinton琼脂(MHA)培养基15ml,充分摇匀,开盖,在净化台上适当消除冷凝水,待培养基凝固。同一浓度的药液平行做2个平板。用吸管吸取0.1ml金黄色葡萄球菌稀释液(金葡菌浓菌液用灭菌的0.9%氯化钠溶液10倍系列稀释至10-3,经测定活菌数为82000cfu/ml)于上述各平板上,用接种棒均匀涂抹于整个平板。同时设一份不含药物的Mueller-Hinton琼脂(MHA)培养
7、基平板作为阳性菌生长对照;一份含药物但不含实验菌的空白对照;一份pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液与Mueller-Hinton琼脂(MHA)培养基混合的稀释剂对照。2.1.1.3培养、观察结果将制备好的平板置35℃培养18~24h后,观察各平板是否有金葡菌生长,金葡菌不生长的最低药物浓度,即为金葡菌的最低抑菌浓度。结果见表1。 表1平皿法抑菌实验结果(略) +表示试验皿长菌;-表示试验皿未长菌 结果证实,青霉素V钾对金黄色葡萄球菌〔CMCC(B)26003〕高度敏感。林氏咽宁散对金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用
8、,固体平皿法最低抑菌浓度为0.1g/ml。而锡类散在此系列浓度下对金葡菌的抑菌作用不明显。 2.1.2液体试管法〔1,2〕采用液体培养基倍比稀释法,用Mueller-Hinton(M-H)肉汤培养基对林氏咽宁散进行定量抗金葡菌试验。 2.1.2.1药液稀释取无菌空试管10支,于10支试管中加入Mueller-Hinton(M-H)肉汤培养基
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