葛根总黄酮提取物的含量测定研究

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1、葛根总黄酮提取物的含量测定研究作者：李婷，郑彩美，张彤，陶建生【摘要】　　目的测定葛根提取物中有效成分葛根素及总黄酮的含量。方法采用高效液相色谱法对其中的葛根素进行含量测定；采用紫外分光光度法对其中的总黄酮进行含量测定。结果葛根素含量在0.017536～1.7536μg范围时与峰面积呈良好线性关系（r=0.99997），加样回收率为99.50%，RSD为1.36%；总黄酮的线性范围为2.192～10.92μg·ml-1（r=0.99955），加样回收率为100.69%，RSD为1.29%。结论所建立的分析

2、方法简便、准确、可靠，重复性好，可用于葛根提取物中葛根素和总黄酮的测定。【关键词】葛根提取物；高效液相色谱法；紫外分光光度法　　Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentsofpuerarinandtotalflavonoidsinextractsofPuerarialabta(asilC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为甲醇-水(26∶74)；流速1.0ml/min；柱温30℃；检测波长250nm；进样量20μl。按上述条件进行含量测定，此条件下，葛根

3、素能与其它组分达到基线分离，与相邻的色谱峰分离度大于1.5，保留时间适中。阴性对照溶液对其含量无干扰。葛根素峰理论塔板数均不小于3000。结果见图1。　　2.1.2对照品贮备液配制精密称取葛根素对照品5.48mg置25ml量瓶中，加30%乙醇使溶解并定容至刻度，浓度为219.2μg·ml-1，作为对照品贮备液。　　2.1.3供试品溶液配制取葛根总黄酮提取物约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加入30%乙醇适量，溶解后定容。再从中精密吸取1ml置10ml量瓶中，以30%乙醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm

4、微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。　　2.1.4空白溶液的制备取30%乙醇溶液10ml，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。　　2.1.5线性关系考察分别精密量取“2.1.2”项下的对照品溶液适量，依次稀释，30%乙醇溶液定容，分别配制成0.8768，2.192，21.92，43.84，65.76，87.68μg·ml-1的一系列浓度梯度的对照品溶液。分别吸取上述的对照品溶液各20μl，按“2.1.1”项下条件进行测定。以峰面积积分值为纵坐标Y，葛根素对照品的浓度为横坐标X（μg·ml-1），

5、绘制标准曲线，得回归方程：Y=80.583X-16.705，r=0.99997。表明葛根素在进样量0.017536～1.7536μg范围内，与峰面积呈良好线性关系。　　2.1.6精密度实验取“2.1.5”项下低、中、高浓度的3个对照品溶液，按“2.1.1”项下条件进行测定。分别连续进样5次，得葛根素的峰面积，计算RSD分别为1.03%，0.29%，0.37%。表明仪器精密度良好。　　2.1.7样品溶液的稳定性实验取同一供试品溶液，按0，1，2，4，8，12，24h时间间隔，在“2.1.1”项下条件进行测定

6、，得葛根素峰面积，RSD为0.89%。表明供试品溶液在24h内稳定。　　2.1.8重复性实验取同一批样品5次，照“2.1.3”项下方法处理，制备样品供试液。按“2.1.1”项下条件进行测定，得葛根素峰面积，计算其质量分数，结果RSD为0.69%。表明重复性良好。　　2.1.9加样回收实验精密称取已知含量的样品9份，每份约5mg，加入不同量的葛根素对照品溶液，按“2.1.3”项下的方法制备供试液，按“2.1.1”项下条件进行含量测定，计算回收率。结果见表1。表1加样回收率试验结果（略）结果表明色谱条件具有较

7、强的可靠性。　　2.1.10提取物中葛根素含量测定取3批葛根总黄酮提取物适量，精密称定，按“2.1.3”项下制备，按“2.1.1”项下条件进行含量测定，测定结果按外标法计算。结果见表2。表2提取物中葛根素含量测定结果（略）　　2.2葛根总黄酮含量测定　　2.2.1供试品溶液的制备取葛根总黄酮提取物约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加入30%乙醇适量，溶解后定容。再从中精密吸取1ml置100ml量瓶中，以30%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。　　2.2.2线性关系考察精密量取“2.1.2”项下的

8、对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml分别置于50ml量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀，配制成2.192～10.92μg·ml-1的一系列浓度梯度的对照品溶液。以30%乙醇为空白对照，250nm处测定吸收度。以吸光度值为纵坐标Y，葛根素对照品浓度为横坐标X（μg·ml-1），绘制标准曲线，得回归方程：Y=13.688X-0.020，r=0.99955，表明总黄酮含量在2.192～10.92μg·ml-1范围内，与