不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定

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1、不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定作者：王言才段金廒华永庆宿树兰【摘要】　　目的建立不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定方法。方法采用RP-HPLC法，以甲醇-水（32∶68）为流动相，检测波长为250nm测葛根素含量；紫外分光光度法测柴葛、粉葛中总黄酮含量。结果葛根素峰分离度提高，峰形改善；葛根素0.204～2.04μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9999），回收率为98.7%(n=5)，精密度RSD=0.86%。总黄酮浓度在4.08～16.32μg/ml范围内与吸收度线性关系良好（

2、r=0.9998)。结论该法灵敏、准确、简便易行,重复性好,可用于中药葛根药材及饮片的质量控制。【关键词】柴葛粉葛葛根素总黄酮高效液相色谱　　Abstract:ObjectiveTostudythedeterminationmethodofpuerarinandisoflavonesinPuerarialobata(ethodsTheseparationedonRPHPLCobilephaseofCH3OH-H2O(32∶68V/V)solutionandthedetectionforthedet

3、erminationofPueraria.UV-spectrophotometryforthedeterminationofisoflavones.ResultsPuerarinandotherpeaksl(r=0.9998).ConclusionThismethodissensitive,accurateandreproducible.ItcanbeusedasthequalitycontrolmethodofPuerarialobataanddrug.　　Keysonii；Pueraria；is

4、oflavones；HPLC　　葛根为豆科植物柴葛Puerarialobata(illenium数据处理系统;m×250mm,5μm)；流动相∶甲醇-水（32∶68）；流速1ml/min；检测波长250nm；柱温22℃；进样体积10μl。理论板数按葛根素峰计算不低于5000。在该色谱条件下，样品中的葛根素与其它峰均能达到基线分离，保留时间在14.3min左右，对照品与样品的色谱图见图1。　　图1对照品Ⅰ、柴葛索氏提取Ⅱ、粉葛索氏提取Ⅲ的HPLC色谱图（略）　　2.1.2对照品溶液的制备精密称取葛根素

5、对照品5.1mg，甲醇定容于25ml量瓶。分别移取0.5，1.0，2.0，2.5ml于5ml量瓶，水定容，与原液共同作为HPLC用对照品溶液。　　2.1.3供试品溶液的制备　　热回流提取法：精密称取柴葛、粉葛粉末（过50目筛）各0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，称重。回流提取30min，放冷，称重并以30%乙醇补足减失重量，摇匀过滤，取续滤液为供试品，待测。　　索氏提取法：称取柴葛、粉葛粉末各0.5g,精密称定，以甲醇为提取剂提取4h，过滤，浓缩提取液并用甲醇定容于10ml量瓶。

6、超声处理30min，取上清液以水定容于10ml量瓶，待测。　　2.1.4线性关系考察取对照品溶液，按照“2.1.1”色谱条件进样10μl，葛根素进样量X(μg)为横坐标，以峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为：Y=3.5076×106X+3.2745×104，r=0.9999。结果表明，葛根素进样量在0.204～2.04μg范围内与峰面积线性关系良好，可用外标两点法计算含量。　　2.1.5精密度考察在“2.1.1”项色谱条件下，吸取同一对照品溶液10μl，连续进样5次，测得峰面积，RSD=0.

7、8%，表明进样与峰面积积分的精密度良好。　　2.1.6重复性考察取同一批柴葛、粉葛样品5份，按“2.1.3”项下的方法制样后，以“2.1.1”项色谱条件进样10μl，测定葛根素的峰面积，按外标法计算含量，RSD=2.8%，表明分析方法重复性良好。　　2.1.7稳定性考察精密吸取对照品溶液10μl，分别在0，1，2，4，8，12，24，48h时进样，在“2.1.1”项下色谱条件下测定峰面积，其RSD值为1.4%。表明葛根素在室内正常条件下48h内稳定，因此整个实验过程可以在常温不避光的条件下操作。　　

8、2.1.8回收率考察精密称取已知葛根素含量的同一样品药材粉末5份，20mg/份，精密称定后，每份加入浓度为0.204mg/ml的对照品溶液2.5～3.3ml，按“供试品溶液制备”项下操作，精密吸取10μl，进样，计算回收率。结果见表1。　　表1加样回收率测定结果（略）　　2.1.9样品测定按“供试品溶液制备”项下操作，制备各样品溶液，精密吸取10μl，进样，在所选色谱条件下测定，外标两点法计算含量，结果见表2。　　表2样品中葛根素测定结果（略）　　2.2紫外分光光度法