不同配方培养基对小刺猴头子实体多糖含量的影响

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1、不同配方培养基对小刺猴头子实体多糖含量的影响黄勇，张金亭，李金花，于文斌，赵丽茹，王德清，蔡广知【摘要】目的：考察不同配方培养基对小刺猴头子实体多糖含量的影响。方法：选择木屑、玉米芯以及麦麸皮为主要原料组成3种不同配方。结果：以78%玉米芯为主的配方，小刺猴头子实体多糖含量较高，不同配方之间多糖含量比较有显著差异。结论：该结果为进一步的制剂开发提供了很好的理论依据。【关键词】小刺猴头培养基多糖含量　　小刺猴头菌Hericiumcaput-medusae(Bull.expr)pers.系多孔菌目猴头菌科真菌，具有与猴头菌相类似的药理作用及临床功效〔1-4〕。目前已

2、有以小刺猴头发酵浸膏为原料治疗慢性胃炎的制剂应用于临床〔5〕。我们在以前研究的基础上，对小刺猴头子实体多糖在化学结构，药理作用等方面进行了系统的研究。结果表明：小刺猴头子实体多糖可明显抑制胃窦及胃体粘膜的萎缩变薄，增加胃蛋白酶消化活性，降低血清胃泌素含量。而对于小刺猴头菌不同配方培养基对多糖含量的影响则未见报道。为使小刺猴头子实体的栽培工作规范化以及质量可控，我们对此进行了研究分析，现报道如下：　　1材料与方法　　1.1供试菌种小刺猴头79001菌株由本所药用真菌研究室提供，母种采用PDA培养基，原种用棉籽壳培养基，1200紫外分光光度计，试剂均为分析纯。　　1

3、.2培养基配方试验设3个培养基配方，各配方原料组成见表1,每个配方3次平行试验，含量测定结果用均值±标准差表示，采用组间t检验判断差异的显著性，统计软件SPSS11.0。　　表1不同培养基配方原料组成（略）　　1.3栽培方法选新鲜、无霉、无虫的培养基原料，按配方称重，清水浸泡24h，沥水后加辅料充分拌匀，使含水量为65%-70%，聚丙烯袋装料，126℃灭菌1.5h，无菌操作接种，20-24℃下发菌，定期观察菌丝生长及污染情况，当菌丝体生长到袋料的1/2-2/3时，移入14-24℃的出菇间，常规管理出菇，子实体成熟后及时采收。　　1.4多糖含量测定3.5二硝基水

4、杨酸比色法〔6〕　　1.4.1对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成每ml含1mg的溶液。　　1.4.2标准曲线的制备精密量取葡萄糖对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6ml，分别置于25ml量瓶中，加水补至2.0ml，分别精密加入3.5—二硝基水杨酸试液1.5ml混匀，以2ml蒸馏水和1.5ml3.5-二硝基水杨酸混合试剂为空白，沸水浴5min,冷却至室温，再分别加入21.5ml蒸馏水，摇匀。于520nm波长处比色，经线性回归得回归方程：A=1.0200C-0.0740(r=0.9999，n=3)。结果

5、显示含量在0.2mg-1.6mg范围内线性关系良好。　　1.4.3供试品溶液的制备〔7〕取1、2、3号配方小刺猴头子实体干燥粉末各10g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水100ml，加热回流提取1h，离心，如此重复提取1次，离心液合并，浓缩后移至100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取4ml，加乙醇20ml，搅拌，离心，沉淀加水溶解，置50ml量瓶中，稀释至刻度。　　1.4.4精密度试验取对照品溶液，重复测定5次，RSD为0.15%。　　1.4.5稳定性试验取供试品溶液，间隔一定时间，在8h内测定5次，RSD为1.46%,表明供试品溶液在8h内稳定性良好。　　1

6、.4.6重现性试验取同一批号小刺猴头子实体5份，分别制备供试品溶液，测定吸光度，RSD为1.35%，表明样品重现性良好。　　1.4.7加样回收率试验取已知含量的样品供试液3份，每份精密加入一定量的葡萄糖对照品，依法测定，结果见表2。　　表2加样回收率测定（略）　　1.5测定方法　　1.5.1总糖的测定精密吸取供试品溶液2ml置25ml量瓶中，加6N盐酸8ml，置沸水浴中加热30min，冷却至室温，加一滴酚酞指示剂，用20%氢氧化钠中和至微红色，加蒸馏水至刻度，摇匀、过滤。精密吸取1ml按标准曲线项下方法测定，根据测得的吸光度值，按回归方程计算含量。　　1.5.2

7、还原糖的测定精密量取供试品溶液5ml置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得。精密量取1ml按标准曲线项下方法测定，根据回归方程计算含量。多糖含量(%)按总糖含量(%)减去还原糖含量(%)计算。　　2结果与分析　　2.1多糖测定结果不同配方培养基得到的小刺猴头子实体多糖测定结果，见表3。　　表3不同配方培养基多糖测定结果（略）　　注：与1号配方比较**P＜0.01；与3号配方比较△P＜0.05，△△P＜0.01。　　　　以上结果表明，2号配方无论是从粗多糖重、多糖的百分含量以及多糖重方面与1号和3号相比均差异显著，因此选择2号配方为小刺猴头子实体栽培的基础配方

8、。此结论尚需在进一步的规