l5前根切断大鼠模型中背根神经节p2x3受体表达论文

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1、L5前根切断大鼠模型中背根神经节P2X3受体表达论文【摘要】目的：探讨L5前根切断（L5VRT）大鼠神经病理性疼痛模型背根神经节（DRG）P2X3受体表达。方法：雄性SD大鼠30只，随机分为5组（n=6），A组（L5VRT术后3d）、B组（L5VRT术后7d）、C组（L5VRT术后14d）、D组（L5VRT术后21d）模型组和E组（假手术组），E组仅行半椎板切除术暴露左侧脊髓，分别在各自的时间点灌注取材L5背根神经节，用免疫荧光染色方法观察P2X3受体表达的变化。结果：（1）L5前根切断手术后，大鼠从次日开始即能产生双足明显的机械痛敏，与E组相比差异有统计学意义

2、（P0.05）.freelbar5dorsalrootganglion（L5DRG）bar5ventralroottransection(L5VRT).Methods:ThirtymaleSpragueDalydividedinto5groups,groupA3daysafterL5VRT,groupB7days,groupC14days,groupD21daysandgroupEofshamoperation,ilaminectomy.RatsineachgroupaldehydeandmaterialsL5dosalrootganglionsandthec

3、hangesofexpressionofP2X3receptormunofluorescencestaining.Results:(1)paredechanicalallodyniaechanicalallodynia;(2)ThechangesofexpressionofP2X3receptorinDRGofratsightplayaroleinthemechanismofmechanicalallodynia.［Keybar5ventralroottransection;Dorsalrootganglion神经病理性疼痛是由于外周或中枢神经系统的直接损伤或功

4、能紊乱所致，在损伤修复后疼痛仍可能长期存在，它以自发性疼痛、痛觉过敏、异常性疼痛为特征，其机制复杂，目前认为与外周和中枢敏化相关［13］。背根神经节（dorsalrootganglion，DRG）作为痛觉传入的第一级神经元，在痛觉的外周机制中起着极为重要的作用。近年来研究表明，DRG神经元在炎性痛和神经源性痛的情况下可发生显著的可塑性变化，如神经肽、受体、酶和细胞表面分子的表达都发生了不同水平的上下调变化。P2X3受体属于嘌呤受体（purinergicreceptors），它选择性地表达在DRG神经元中与疼痛感觉相关的中、小神经元［4］。L5前根切断模型（L5

5、VRT）是一种较新的疼痛模型，该模型在椎管内切断L5的前根，而不影响感觉神经，但是会出现很明显的机械痛敏和短暂的热痛敏，并且会出现明显的镜像痛［5］。本文通过观察该模型中背根神经节P2X3受体表达的变化，探讨其机械痛敏的产生机制。1材料与方法1.1实验材料及器材手术器械（无菌手术刀、有齿镊、咬骨钳、线剪、眼科剪、三棱针、玻璃分针等）；VonFreyFilament（stoelting，USA）及相关设备；动物灌注装置（自制）；冰冻切片机（leicaCM3050，德国）；荧光显微镜（leicaDFC350FX，德国）；10%水合氯醛（购自中山大学第一附属医院）；兔

6、抗P2X3受体血清（neuromics，Minneapolis，MN，USA)；羊抗兔的IgGcy3（chemicon）；正常羊血清（北京中山金桥）；牛血清白蛋白（北京中山金桥）；多聚甲醛（sigma，USA）；TritonX100（sigma，USA）。1.2动物及分组选用SpragueDaL/kg，i.p.）大鼠，按照Li等［5］描述的方法对大鼠行L5前根切断手术。先在L4至L5间进行半椎板切除术，暴露脊髓后，用三棱针轻轻划破外侧脊膜，然后用一特制的玻璃分针轻轻从背根下方提起前根，用虹膜剪剪去2～3mm的前根，分层缝合。假手术组仅行半椎板切除术，暴露脊

7、髓，不行前根切断。1.4行为学测试用VonFrey纤维丝测定大鼠的机械刺激撤足阈值（paent（0.41、0.70、1.20、2.04、3.63、5.50、8.51、15.14g）分别对大鼠后肢左右脚足心部进行机械性刺激，每次刺激持续时间为6～8s。首先用力度为2.04的VonFreyFilament开始测试，测试时VonFreyFilament垂直，微弯，在大鼠足心部保持6～8s，出现快速撤足为阳性反应，若撤足反应为阴性则选用刺激强度呈对数递增的相邻vonFreyfilament继续刺激，若撤足反应为阳性，则选择相邻递减的刺激强度给予刺激。如此反复，以第一个转

8、折点的前一点为起点，连续