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时间:2018-11-26
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1、L5前根切断大鼠模型中背根神经节P2X3受体表达论文【摘要】目的:探讨L5前根切断(L5VRT)大鼠神经病理性疼痛模型背根神经节(DRG)P2X3受体表达。方法:雄性SD大鼠30只,随机分为5组(n=6),A组(L5VRT术后3d)、B组(L5VRT术后7d)、C组(L5VRT术后14d)、D组(L5VRT术后21d)模型组和E组(假手术组),E组仅行半椎板切除术暴露左侧脊髓,分别在各自的时间点灌注取材L5背根神经节,用免疫荧光染色方法观察P2X3受体表达的变化。结果:(1)L5前根切断手术后,大鼠从次日开始即能产生双足明显的机械痛敏,与E组相比差异有统计学意义
2、(P0.05).freelbar5dorsalrootganglion(L5DRG)bar5ventralroottransection(L5VRT).Methods:ThirtymaleSpragueDalydividedinto5groups,groupA3daysafterL5VRT,groupB7days,groupC14days,groupD21daysandgroupEofshamoperation,ilaminectomy.RatsineachgroupaldehydeandmaterialsL5dosalrootganglionsandthec
3、hangesofexpressionofP2X3receptormunofluorescencestaining.Results:(1)paredechanicalallodyniaechanicalallodynia;(2)ThechangesofexpressionofP2X3receptorinDRGofratsightplayaroleinthemechanismofmechanicalallodynia.[Keybar5ventralroottransection;Dorsalrootganglion神经病理性疼痛是由于外周或中枢神经系统的直接损伤或功
4、能紊乱所致,在损伤修复后疼痛仍可能长期存在,它以自发性疼痛、痛觉过敏、异常性疼痛为特征,其机制复杂,目前认为与外周和中枢敏化相关[13]。背根神经节(dorsalrootganglion,DRG)作为痛觉传入的第一级神经元,在痛觉的外周机制中起着极为重要的作用。近年来研究表明,DRG神经元在炎性痛和神经源性痛的情况下可发生显著的可塑性变化,如神经肽、受体、酶和细胞表面分子的表达都发生了不同水平的上下调变化。P2X3受体属于嘌呤受体(purinergicreceptors),它选择性地表达在DRG神经元中与疼痛感觉相关的中、小神经元[4]。L5前根切断模型(L5
5、VRT)是一种较新的疼痛模型,该模型在椎管内切断L5的前根,而不影响感觉神经,但是会出现很明显的机械痛敏和短暂的热痛敏,并且会出现明显的镜像痛[5]。本文通过观察该模型中背根神经节P2X3受体表达的变化,探讨其机械痛敏的产生机制。1材料与方法1.1实验材料及器材手术器械(无菌手术刀、有齿镊、咬骨钳、线剪、眼科剪、三棱针、玻璃分针等);VonFreyFilament(stoelting,USA)及相关设备;动物灌注装置(自制);冰冻切片机(leicaCM3050,德国);荧光显微镜(leicaDFC350FX,德国);10%水合氯醛(购自中山大学第一附属医院);兔
6、抗P2X3受体血清(neuromics,Minneapolis,MN,USA);羊抗兔的IgGcy3(chemicon);正常羊血清(北京中山金桥);牛血清白蛋白(北京中山金桥);多聚甲醛(sigma,USA);TritonX100(sigma,USA)。1.2动物及分组选用SpragueDaL/kg,i.p.)大鼠,按照Li等[5]描述的方法对大鼠行L5前根切断手术。先在L4至L5间进行半椎板切除术,暴露脊髓后,用三棱针轻轻划破外侧脊膜,然后用一特制的玻璃分针轻轻从背根下方提起前根,用虹膜剪剪去2~3mm的前根,分层缝合。假手术组仅行半椎板切除术,暴露脊
7、髓,不行前根切断。1.4行为学测试用VonFrey纤维丝测定大鼠的机械刺激撤足阈值(paent(0.41、0.70、1.20、2.04、3.63、5.50、8.51、15.14g)分别对大鼠后肢左右脚足心部进行机械性刺激,每次刺激持续时间为6~8s。首先用力度为2.04的VonFreyFilament开始测试,测试时VonFreyFilament垂直,微弯,在大鼠足心部保持6~8s,出现快速撤足为阳性反应,若撤足反应为阴性则选用刺激强度呈对数递增的相邻vonFreyfilament继续刺激,若撤足反应为阳性,则选择相邻递减的刺激强度给予刺激。如此反复,以第一个转
8、折点的前一点为起点,连续
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