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时间:2018-11-11
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1、L5前根切断大鼠模型中背根神经节P2X3受体表达【摘要】目的:探讨L5前根切断(L5VRT)大鼠神经病理性疼痛模型背根神经节(DRG)P2X3受体表达。方法:雄性SD大鼠30只,随机分为5组(n=6),A组(L5VRT术后3d)、B组(L5VRT术后7d)、C组(L5VRT术后14d)、D组(L5VRT术后21d)模型组和E组(假手术组),E组仅行半椎板切除术暴露左侧脊髓,分别在各自的时间点灌注取材L5背根神经节,用免疫荧光染色方法观察P2X3受体表达的变化。结果:(1)L5前根切断手术后,大鼠从次日开始即能产生双足明显的机械痛敏,与E组相比差异有
2、统计学意义(P<0.05),这种痛敏情况持续至少4周;(2)免疫荧光染色发现B组、C组及D组模型组同侧L5DRG的P2X3受体的表达明显增加(P<0.01),B组、C组及D组模型组对侧L5DRG的P2X3受体的表达与E组相比变化不明显(P>0.05);A组模型组的双侧L5DRG的P2X3受体的表达与E组相比无明显变化(P>0.05)。结论:(1)L5前根切断疼痛模型能产生双足明显的机械痛敏;(2)该模型背根神经节P2X3受体的表达变化可能参与其机械痛敏的机制。【关键词】P2X3受体;神经病理性疼痛;L5前根切断;背根神经节
3、 [Abstract]Objective:ToobservetheP2X3receptorexpressioninlumbar5dorsalrootganglion(L5DRG)bar5ventralroottransection(L5VRT).Methods:ThirtymaleSpragueDalydividedinto5groups,groupA3daysafterL5VRT,groupB7days,groupC14days,groupD21daysandgroupEofshamoperation,ilaminectomy.Ratsinea
4、chgroupaldehydeandmaterialsL5dosalrootganglionsandthechangesofexpressionofP2X3receptormunofluorescencestaining.Results:(1)paredechanicalallodyniaechanicalallodynia;(2)ThechangesofexpressionofP2X3receptorinDRGofratsightplayaroleinthemechanismofmechanicalallodynia. [Keybar5vent
5、ralroottransection;Dorsalrootganglion 神经病理性疼痛是由于外周或中枢神经系统的直接损伤或功能紊乱所致,在损伤修复后疼痛仍可能长期存在,它以自发性疼痛、痛觉过敏、异常性疼痛为特征,其机制复杂,目前认为与外周和中枢敏化相关[13]。背根神经节(dorsalrootganglion,DRG)作为痛觉传入的第一级神经元,在痛觉的外周机制中起着极为重要的作用。近年来研究表明,DRG神经元在炎性痛和神经源性痛的情况下可发生显著的可塑性变化,如神经肽、受体、酶和细胞表面分子的表达都发生了不同水平的上下调变化。P2X3受体
6、属于嘌呤受体(purinergicreceptors),它选择性地表达在DRG神经元中与疼痛感觉相关的中、小神经元[4]。L5前根切断模型(L5VRT)是一种较新的疼痛模型,该模型在椎管内切断L5的前根,而不影响感觉神经,但是会出现很明显的机械痛敏和短暂的热痛敏,并且会出现明显的镜像痛[5]。本文通过观察该模型中背根神经节P2X3受体表达的变化,探讨其机械痛敏的产生机制。 1材料与方法 1.1实验材料及器材手术器械(无菌手术刀、有齿镊、咬骨钳、线剪、眼科剪、三棱针、玻璃分针等);VonFreyFilament(stoelting,USA)及相关
7、设备;动物灌注装置(自制);冰冻切片机(lEIcaCM3050,德国);荧光显微镜(leicaDFC350FX,德国);10%水合氯醛(购自中山大学第一附属医院);兔抗P2X3受体血清(neuromics,Minneapolis,MN,USA);羊抗兔的IgGcy3(chemicon);正常羊血清(北京中山金桥);牛血清白蛋白(北京中山金桥);多聚甲醛(sigma,USA);TritonX100(sigma,USA)。 1.2动物及分组 选用SpragueDaL/kg,i.p.)大鼠,按照Li等[5]描述的方法对大鼠行L5前根切断手术。先
8、在L4至L5间进行半椎板切除术,暴露脊髓后,用三棱针轻轻划破外侧脊膜,然后用一特制的玻璃分针轻轻从背根下方提起前根,用虹膜
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