大鼠触液核p2x3受体的表达及其在骨癌痛条件下的变化

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1、徐州医学院硕士学位论文大鼠触液核P2X3受体的表达及其在骨癌痛条件下的变化姓名：郑翠娟申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：张励才2012-04徐州医学院硕士学位论文———’。———————————————————————————————————————————————————————————————一一一大鼠触液核P2X3受体的表达及其在骨癌痛条件下的变化中文摘要目的观察大鼠触液核P2X3受体的表达以及在骨癌痛慢性过程中的变化情冽，探讨触液核的功能及其在骨癌痛过程中的作用机制，为减轻临床骨癌疼痛提供甸‘能的新的依据。方法SD雌性大鼠(1609

2、．1809)1．正常大鼠处死前48小时侧脑室引入霍乱毒素B亚单位与辣根过氧化物酶复厶物(choleratoxinBconjugatedtohorseradishperoxidase，CB．HRP)定位触液核神经元，取触液核所在段脑组织，冰冻切片，做P2X3单标及cB．HRP／P2X3双械免疫荧光反应，用免疫荧光化学双重标记技术与激光共聚焦显微镜技术相结合，!观察正常大鼠触液核中是否有P2X3受体的表达。2．随机分为二组：’胫骨癌痛组(BCP)、假手术组(S)。制作模型，BCP组胫骨平台处注射Walker256乳腺癌细胞，s组注射等体积的生理盐水。

3、用电子测痛仪测定两组大鼠术前和术后第1、5、7、14和21天机械缩足阈值(mechanicalwithdrawalthreshold，MWT)；X线照射观察手术后第7、14、21天骨质有无破坏友其破坏程度。以上用来证明模型的可靠性。3．复制(1)中的荧光方法，观察骨癌痛和假手术组术后第1、5、7、14、21天大鼠触液核上P2X3受体的表达变化。Image．ProPlus6．0图像用于计数两组大鼠各时间点的CB．HRP阳性、P2X3阳性和CB．HRP／P2X3双标阳性神经元细胞。结果1．『F常大鼠触液核有P2X3受体表达。2．术前MWT值骨癌组的5

4、2．77+2．67和假手术组的51．08±5．62，无明显差异(P>O．05)；第5天骨癌组的MWT为45．91_+2．66，闽值小于假手术组的52．11±4．04徐州医学院硕士学位论文和术日订基础值，差异有统计学意义(P<0．05)；第7天骨癌组阈值为31．84+3．15，明显低于假手术组的50．41±2．26和术前基础值(P

5、，第14天记为2，第21天记为3。3．手术后第1天骨癌痛组CB．HRP／P2X3增加为252+26，与假手术组209+_25相比差异有统计学意义(P<0．05)；第5天骨癌组双标数量增加到313+_21，假手术组为205+-23，差异有统计学意义(P

6、越严重，阈值越来越低到第21天达到最低值；X线提示骨质破坏随时间越来越强，与机械痛敏相一致。根据以往研究表明骨癌痛模型科学，可靠。3．骨癌痛后第1天触液核上P2X3受体就开始增加并且与术前值和假手术相比差异有统计学意义，并随时间一直持续到第21天达到高峰，结合MWT和X线结果提示触液核P2X3受体不仅参与了骨癌的发生和同时参与了骨癌的维持过程。这为临床骨癌痛包括各种骨癌转移痛病人减轻临床症状提供了新的依据。关键词触液核；触液核神经元；P2X3；骨癌痛；疼痛本课题受2009年国家自然科学基金资助(基金号：30871307)徐州医学院硕士学位论文Ex

7、pressionofP2X3receptorinthecerebrospinalfluid-contactingnucleusofratsanditschangesinbonecancerpareAbstractCSF—CN48hbeforekillingit．GetbraintissueofCSF·CNinthefrozensection，andthenmadeP2X3receptorsinglelabeledandCB-HRP／P2X3doublelabeled．：Adouble—labeledimmunofluorescenttechniq

8、ueandlaserscanningconfocalmicroscopywereusedtoidentifytheexpressiono