慢性高尿酸血症大鼠模型建立方法的探讨论文

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1、慢性高尿酸血症大鼠模型建立方法的探讨论文张培苗志敏李长贵牛佳鹏【摘要】目的探讨慢性高尿酸血症大鼠模型的建立方法。方法雌性ethodsFortyfemaleIX180，日本);氧嗪酸钾(美国Sigma公司);羧甲基纤维素钠(分析纯，中国上海亨达精细化学品有限公司);生化试剂(青岛益信医学科技有限公司);酵母干粉(安琪酵母有限公司);腺嘌呤(美国Amresco公司)。1.3各种灌胃液及高酵母饲料的制备1.3.1羧甲基纤维素钠乳剂的制备电子称量仪准确称取羧甲基纤维素钠粉剂，用生理盐水配成8g/L乳状液。1.3.2氧嗪酸钾溶液的制备使用电子天平准确称取氧嗪酸钾，用8g

2、/L羧甲基纤维素钠配成终浓度25g/L的生理盐水乳悬液6。1.3.3腺嘌呤溶液制备将腺嘌呤以蒸馏水溶解成4.0g/L的悬浊液，置4℃冰箱备用。1.3.4高酵母饲料的制备将酵母干粉均匀拌入粉碎的大鼠颗粒饲料中重新压粒成形,控制其在饲料中的质量分数为0.10。1.4实验分组及方法大鼠适应性饲养7d后，随机分为对照组20只、模型组20只。根据文献7的方法，模型组饲以质量分数0.10的高酵母饲料，并以100mg/(kg·d)腺嘌呤溶液灌胃，以制备高尿酸血症模型;对照组饲以普通大鼠颗粒饲料，并给予同体积蒸馏水灌胃。每周监测血尿酸水平变化，第7周血尿酸水平开始下降时，改进造

3、模方法，模型组饲以质量分数0.10的高酵母饲料，并以50mg/(kg·d)腺嘌呤溶液灌胃，同时给予氧嗪酸钾乳悬液100mg/(kg·d)分2次皮下注射，以维持大鼠高尿酸血症状态;对照组饲以普通大鼠颗粒饲料，并给予同体积蒸馏水灌胃，继续监测血尿酸水平。1.5实验指标检测1.5.1大鼠饮食、体质量等一般情况监测每日观察两组大鼠进食情况、精神状态;每周监测大鼠体质量变化。1.5.2生化指标的监测大鼠禁食14h后，内眦静脉采血，分离出血清，在全自动生化分析仪上测定血尿酸(SUA)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)水平。1.5.324h尿

4、量和尿的尿酸浓度测定将大鼠放入大鼠代谢笼中24h以收集尿液，自由饮水，记录24h总尿量。然后将全部尿液混匀，留取5mL，测尿酸浓度。1.6统计方法应用SPSS17.0及PPMS1.58统计软件进行统计处理。2结果2.1两组一般状态比较随着造模时间的延长，模型组饮水量逐渐增加，最高饮水量达对照组的2～3倍;同时体质量逐渐下降，尿量逐渐增多，体毛干枯无光泽、精神委靡、活动减少等，严重者出现肌肉震颤、抽搐，衰竭而死亡，本组共死亡6只大鼠。对照组饮水量、尿量、体质量无明显变化，反应机敏，活动正常，体毛有光泽，无大鼠死亡。2.2两组血生化水平比较2周后模型组大鼠血清SUA

5、水平明显升高，与对照组相比差异均有显著意义(t=5.438～8.404，P0.05)。见表1。模型组大鼠3、10周的血清BUN、Cr、TC水平与对照组相比差异有显著性(t′=2.530～12.232,P0.05)。见表2、3。2.3尿液变化模型组3周后尿量逐渐增加，肾脏排泄尿酸功能减退，尿尿酸减少，同时尿密度减低，5周时与对照组相比差异均有显著性(t=5.553～18.296，P0.05)。见表4。表1两组大鼠不同时期血尿酸水平比较表2两组大鼠3周时血生化水平比较表3两组大鼠10周时血生化水平比较表4高嘌呤饮食5周后大鼠24h尿量、饮水量、尿密度及尿尿酸的比较(

6、±s)组别24h尿量(V/mL)24h饮水量(V/mL)尿密度尿尿酸2.4病理变化对照组大鼠肾脏外观无肿胀，色红有光泽，包膜易于剥离，肾小球、肾小管形态正常，皮质、髓质分界清楚。模型组大鼠肾脏体积增大，两肾呈灰白色，表面呈颗粒状，肾包膜与肾实质粘连不易剥离，切面皮髓质分界不清。光镜检查：对照组肾小球囊腔内未见异常物质,肾曲小管、集合管亦未见异常病变。模型组部分肾小球萎缩，数量减少，肾小管浊肿,肾小管及间质部位有较多的尿酸盐结晶沉积,结晶周围可见异物巨细胞反应，间质有灶性淋巴细胞浸润，个别区域有灶性纤维化;高倍镜下观察肾小管间质部位,可见尿酸盐结晶呈针状、双折光放

7、射形排列。3讨论尿酸是人类嘌呤代谢的终产物，其血中浓度受遗传和环境两种因素的影响。原发性痛风的病因,除1%～2%的病人与先天性酶缺陷有关外,多数病因不明,但临床可见有相当一部分因进食高嘌呤饮食而诱发。高嘌呤饮食可使SUA浓度升高,甚至达到相当于痛风病人的水平9。所以,高尿酸血症是痛风重要的生化基础,痛风危险性与SUA水平有明显的相关性1。近年来，高尿酸血症和痛风的发病率逐渐上升，发病年龄提前，对其病因学、流行病学、分子遗传学的研究渐成为热点。临床治疗正成为大家所关注的问题。高尿酸血症动物模型的建立，为开发研究验证治疗药物提供了一种有效途径，而至今国内外尚没有关于

8、慢性高尿酸血症模型制备的