小牛椎体骨质疏松模型的快速建立

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1、小牛椎体骨质疏松模型的快速建立作者：杨彬奎，雷伟，王军，李运明【摘要】目的：利用乙二胺四乙酸二钠（EDTANa2）脱钙法快速建立牛椎体骨质疏松模型.方法：4具新鲜小牛脊柱，每具选取第6～13节椎体，共32个椎体，采用随机区组设计方法，分成Ⅰ~Ⅷ共8个区组；采用4种处理方法：A处理组（EDTANa2脱钙3ax）及能量吸收值，同时各组取少量松质骨制成组织切片.结果：A，B，D处理组的BMD均值，Fmax均值及能量吸收值均值都低于C处理组（P<0.01），A，D处理组的BMD均值，Fmax均值及能量吸收值均值都低于B处理组（P<0.01），A，D处理组之间差异无

2、统计学意义（P>0.05）.切片显示A，D处理组骨小梁较C组骨小梁变细、数量轻度减少,间距增宽,骨髓腔扩大.结论：应用EDTANa2对牛椎体进行脱钙，可在较短的时间内建立用于生物力学研究的牛椎体骨质疏松模型.【关键词】骨质疏松；疾病模型，动物；生物力学；EDTANa2；骨密度　　0引言　　由于骨质疏松造成的椎弓根螺钉松动、拔出的情况在临床工作中很常见，给脊柱外科手术带来了极大困难［1］.如何提高椎弓根螺钉在骨质疏松患者的固定强度已成为国内外研究的热点.本实验利用乙二胺四乙酸二钠（EDTANa2）对新鲜小牛椎体进行脱钙处理，以期为相关研究建立一种简便、快捷的实验

3、模型.　　1材料和方法　　1.1材料新鲜小牛脊柱4具，每具选取第6～13椎体，8节共32个椎体，X线和骨密度检查均无明显的骨质疏松、先天性畸形、骨折和肿瘤等病变；去除软组织，分解为单个椎体并保持每个椎体的完整性.EDTANa2，NaOH(天津市化学试剂三厂)；椎弓根螺钉采用通用性脊柱内固定系统（universalpolyaxialspinalsystem,UPASS）钉（6.5mm×40mm）（山东威高骨科材料有限公司）；双能X线吸收骨密度（bonemineraldensity,BMD）仪(美国LunarCorp公司)；拉伸试验机(AGSJ,日本岛津公司)；lEica

4、LA全自动研究显微镜（德国莱卡公司）.　　1.2方法　　1.2.1实验分组采用随机区组的设计方法.4具新鲜小牛脊柱，每具选取第6～13节椎体共8节椎体，采用随机区组设计方法分成Ⅰ～Ⅷ共8个区组；根据随机原则，分配至4个处理组：A处理组（EDTANa2脱钙3m丝攻预制双侧椎弓根钉道，然后浸入40g/L甲醛固定6h，再取出清水冲洗、浸泡12h.C处理组不用EDTANa2脱钙处理；A，B，D处理组用0.595mol/L的EDTANa2脱钙液2400mL（加入NaOH约0.713mol/L以调整pH值为7.0)，分别浸泡2，3和4L注射器将浸泡椎体的0.595mol/LE

5、DTANa2脱钙液向每个椎弓根钉道内注射，每周更换1次脱钙液（脱钙液的浓度和量均不变）.　　1.2.3标本检测分别于2，3和4m/min的速度轴向牵拉，直至螺钉被拉出，记录最大轴向拔出力(Fmax)及能量吸收值.　　1.2.4组织切片观察A，B，C，D各组中分别取钉道周壁松质骨制作组织切片，lEIcaLA显微镜下观察.　　统计学处理：采用SPSS13.0统计软件分析.不同处理组BMD均值、Fmax均值及能量吸收值均值均采用随机区组的方差分析及Duntt检验进行比较，BMD与Fmax作Pearson相关分析,MicrosoftOfficeExcel2003软件制图表.

6、P<0.05为差异具有统计学意义.　　2结果　　2.1BMD,Fmax,能量吸收值各处理组的BMD，Fmax和能量吸收值均值（表1）.通过随机区组的方差分析，结果显示，A，B，D处理组的BMD均值、Fmax均值及能量吸收值均值都低于C处理组（P<0.01），A，D处理组的BMD均值、Fmax均值及能量吸收值均值都低于B组（P<0.01），A和D处理组之间差异无统计学意义（P>0.05）.　　表1各不同处理组的骨密度（BMD）、最大轴向拔出力(Fmax)和能量吸收值（略）　　bP<0.01vsC.　　2.2脱钙时间对BMD和Fmax的影响脱钙的

7、时间越长，BMD越低（图1）；脱钙的时间越长，椎弓根螺钉的Fmax也越小（图2）.　　图1骨密度时间变化（略）　　图2最大轴向拔出力时间变化（略）　　2.3BMD和Fmax的相关性分析将BMD与Fmax进行相关性分析，Pearson相关系数r=0.884，P<0.01，显示BMD与椎弓根螺钉的Fmax存在线性正相关（图3）.　　2.4组织切片观察组织切片结果显示,C处理组（未脱钙组）骨组织中骨小梁丰富,相互交连成网状；A处理组（脱钙3o左右；②建立过程繁琐且费用高：需先为羊做去势手术，术后还需行消炎等治疗；需饲养6m