瘢痕疙瘩家系外周血淋巴细胞永生化方法探讨

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1、瘢痕疙瘩家系外周血淋巴细胞永生化方法探讨作者：严欣；高建华；宋玫；刘小军；陈阳　　(南方医科大学南方医院整形外科，广东  广州  510515)摘要：目的  探讨建立瘢痕疙瘩家系永生化细胞库的方法，为研究瘢痕疙瘩的发病机制、诊断和治疗提供长期的标本来源。方法采用EB病毒转化技术，分别采用新鲜血法和冻存血法，将瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系。结果  成功建立了一瘢痕疙瘩家系中27个个体的永生细胞株；新鲜血法较冻存血法可明显提高一次建系成功率。结论  EB病毒转化技术可有效保存原来个体完整的基因组，为以后的相关

2、研究提供了长期的DNA资源。新鲜血法明显优于冻存血法，更适用于永生化细胞库的建立。关键词：瘢痕疙瘩；家系；EB病毒；B淋巴细胞；永生化淋巴母细胞系中图分类号：R619.6  文献标识码：A  文章编号：1673-4254(2006)01-0022-03EstablishmentofimmortalizedlymphoblastoidcellbankofakeloidpedigreeYANXin；GAOJian-hua；SONGMei；LIUXiao-jun；CHENYangDepartmentofPlasticSurgery,N

3、anfangHospital,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,ChinaAbstract:ObjectiveToinvestigateamethodforestablishingimmortalizedlymphoblastoidcellbankofkeloidpedigreesoastoprovidealong-termsourceofspecimensforkeloidresearch.MethodsWithEpstein-Barrvirustransformation,f

4、reshandfrozenbloodsamplescollectedfromallmembersofthekeloidpedigreewereusedrespectivelytoestablishtheimmortalizedlymphoblastoidcelllinesofBlymphocytes.ResultsTwenty-sevenimmortalizedlymphoblastoidcelllinesofthekeloidpedigreewereobtainedsuccessfully,andallcelllinessur

5、vivedcryopreservationinliquidnitrogen.ConclusionsTheimmortalizedlymphoblastoidcellbankofthekeloidpedigreecanpreservethewholegeneinformationandprovidelong-termDNAsourcesforkeloidresearch.Preparationofthecelllineswithfreshbloodismoreefficientthanthatwithfrozenblood.Key

6、words：keloid;pedigree;Epstein-Barrvirus;Blymphocytes;immortallymphoblastoidcelllines收稿日期：2005-10-17基金项目：广东省名医工程(2004)SupportedbyFoundationforPrestigiousDoctorsofGuangdongprovince(2004)作者简介：严  欣(1974-)，男，医学硕士，主治医师，电话：020-61641861，E-mail:yenshin@etang.com通讯作者：高建华，教授，主任

7、医师，博士生导师，电话：020-61641861，E-mail:tanzi@fimmu.com    瘢痕疙瘩的诊断和治疗是整形外科领域研究的重点和难点之一。近年研究表明，瘢痕疙瘩的形成具有明显遗传倾向，故我们拟以内蒙古一瘢痕疙瘩家系为对象进行相关遗传学研究，为避免重复采样并长期保存此家系的DNA资源供持续性研究，我们采用EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)转化技术，将样本外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系，建立了此家系的外周血淋巴细胞永生细胞库，并对新鲜血法和冻存血法两种转化方法进行了探讨。    1 

8、 材料和方法    1.1试剂    产生EBV的B95-8细胞株(中国医学科学院遗传与发育生物学研究所徐玖瑾教授馈赠)，RPMI1640培养基(GIBCO)，特级胎牛血清(HyClone)，淋巴细胞分离液(Pharmacia)，环孢霉素A(CyA)，植物凝集素