菟丝子多糖提取工艺优化及其对脂质过氧化的影响

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1、菟丝子多糖提取工艺优化及其对脂质过氧化的影响作者：张丽娟，张宜欣，古同男，周秀艳【摘要】　　目的优选菟丝子多糖提取的最佳工艺并探讨菟丝子多糖在应激状态下对小鼠脑组织脂质过氧化物反应的影响。方法采用正交实验设计方法优选最佳工艺；比色法测定小鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量。结果影响菟丝子多糖提取率的主要因素为提取温度与料液比；不同剂量的菟丝子多糖均能降低MDA的含量(P<0.05),并能增加SOD的活性(P<0.05)。结论菟丝子多糖最佳提取工艺为超声提取，料液比为1

2、∶15，提取温度为80℃，提取时间为60min；菟丝子多糖具有抗脂质过氧化保护脑组织的作用。【关键词】菟丝子；多糖；提取工艺；脂质过氧化　　Abstract:ObjectiveTooptimizeandestablishtheextractiontechnologyofSemencuscutaeandtoinverstigateitsanti-peroxidationeffectsontheirritatedmousebraintissues.MethodsTheorthogonaltestploye

3、dtotesttheeffectsofthethreefactorsincludingvolumeofperatureofextrctionandtimeofextration.Theextractiontechnologyized.Malondialdehyde(MDA),superoxidedismutase(SOD)inthebraintissueseasuredbycolorimetry.ResultsTheextractiontemperatureandvolumeofSemencuscut

4、ae(P<0.05),andanincreasedSODactivityumprocessisutrasonicextractionandtheconditionisasfolloperatureis80℃,extractiontimeis60minutes.PolysaccharidesfromSemencuscutaehasanti-lipidperoxidationencuscutae;Solublepolysaccharides;Extractiontechnology;Lipidper

5、oxidation菟丝子为常用补益中药，具有补肝肾，益精髓，明目的功效，主治腰膝酸痛、遗精、消渴、尿有余沥、目暗等疾病［1］。2000版《中国药典》规定为旋花科植物菟丝子CuscutachinensisLam.的干燥成熟种子，但在市场上其同属植物南方菟丝子CuscutaaustralisR.Br.)已成为商品药材的主流品种［2］。近年来，菟丝子的研究多集中在对其黄酮类［3，4］和多糖［5，6］成分的研究，但利用超声提取菟丝子多糖的方法尚未见报道。脑组织脂质含量高，易受氧化损伤，有研究表明，脂质过氧化物

6、在脑损伤的病理过程中起重要作用。本文采用正交分析的方法，设计并优化了菟丝子多糖超声提取工艺；并利用耐力游泳造成应激动物模型，通过测量脑组织SOD和MDA的含量，探讨菟丝子多糖对应激小鼠脑组织脂质过氧化物的影响。　　1仪器与材料　　1.1仪器　　TCQ-250超声波清洗器；UV2000紫外－可见分光光度计；LD4-2低速离心机；TGL-16G台式高速离心机；旋转蒸发仪；JA12002电子天平。　　1.2药材　　菟丝子药材购自北京同仁堂，经中国医学科学院药物研究所龚宁波鉴定为Cuscutaaustrali

7、sR.Br.的干燥成熟种子。　　1.3动物　　昆明种雄性小鼠，体重（22.0±2.3）g，由中国医学科学院实验动物中心提供。　　1.4试剂　　SOD测试盒和MDA测试盒均由南京建成生物工程研究所提供。葡萄糖(精制)、浓硫酸、苯酚(重蒸)均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1样品的前处理菟丝子药材用无水乙醇回流2次，残渣风干，保存备用。　　2.2菟丝子多糖的提取流程菟丝子(超声水提取2次)→提取液(过滤)→滤液(浓缩)→浓缩液(醇沉)→沉淀复溶(除蛋白)→水溶液(醇沉)→菟丝子多糖粗品(洗涤，干燥)→菟

8、丝子多糖　　2.3多糖含量测定　　2.3.1标准曲线的制作　　按　　2.4.2测定指标　　将小鼠断头，取其大脑皮质,用生理盐水作为匀浆液，在冰浴中匀浆。取匀浆按试剂盒操作说明分别测定SOD和MDA。　　2.4.3统计学处理　　所有数据均用(±s)表示，采用组间t检验，使用SPSS13.0处理实验数据。　　2.5结果分析　　2.5.1正交实验结果与分析　　选用L9(34)正交表安排实验，测定多糖含量并作直观分析。结果见表2。表2L9(34)正交实验结果与分