玉郎伞多糖对肝星状细胞氧应激脂质过氧化作用的影响

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1、玉郎伞多糖对肝星状细胞氧应激脂质过氧化作用的影响黄必义，黄仁彬，卢曦，段小群【摘要】　　目的研究玉郎伞多糖(YLS)对肝星状细胞（HSC）氧应激脂质过氧化作用的影响及机制。方法用H2O2诱导肝星状细胞脂质过氧化，测定细胞培养上清液中MDA，SOD水平，MTT法测定肝星状细胞的增殖，LDH法检测YLS对肝星状细胞的毒性作用，ELISA法测定I型胶原含量。结果YLS（25～200μg/ml）可明显降低培养上清液中MDA含量和I型胶原水平，抑制肝星状细胞的增殖，提高SOD活力，并呈剂量依赖性。结论YLS对肝星状细胞的增殖及I型

2、胶原的合成具有抑制作用，该作用可能与其抗氧化作用有关。【关键词】玉郎伞多糖肝星状细胞I型胶原　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsanditsmechanismofYulangsanpolysaccharide(YLS)ontheproliferationandcollagenIproductionofhepaticstellatecell（HSC）inducedbyoxidativestress.MethodsThelipidperoxidationofHSCalondialdehy

3、de(MDA)andSODinculturalsupernatantinedbygeneralmethods.CytotoxicityeasuredbyLDHmethod.TheproliferationofhepaticstellatecellseasuredbyMTTmethod.ThecontentofcollagenIeasuredbyELISAmethod.ResultsYLS（25～200μg/ml）concentration-dependentlydecreasedthelevelsofMDAandcoll

4、agenIandthenumberofproliferatingHSC，andincreasedtheactivityofSOD.ConclusionYLScaninhibittheproliferationandcollagenIproductionofhepaticstellatecellinducedbyoxidativestress.Thismightbeassociatederisco，北京拜尔迪生物公司分装）；I型胶原试剂盒（美国BPB公司）。　　1.3仪器　　CO2恒温培养箱（美国ThermoForma，M

5、odel311）；TDL80-2B台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；XD-101倒置显微镜（南京江南光电集团股份有限公司）；相差倒置显微镜（德国Zeiss）；SZX型超净工作台（上海浦东跃欣科学仪器厂）；722s型可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；450型酶标仪（美国Bio-Rad）。　　2方法　　2.1细胞培养及分组将冷冻保存于液氮中的HSC复苏后接种于含10%小牛血清、100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，4mmol/L谷氨酰胺的RMPI1640培养液中，37℃，5%CO2条件下培养。当细胞呈单层

6、致密状时，0.25%胰蛋白酶消化后传代，24h换液，72h再次传代。每次实验均在呈指数生长的细胞中进行。分组：①空白组；②H2O2组；③H2O2+YLS25μg/ml组；④H2O2+YLS50μg/ml组；⑤H2O2+YLS100μg/ml组；⑥H2O2+YLS200μg/ml组；⑦H2O2+VitE50μmol/L组。每组6孔，H2O2浓度均为3.0μmol/L，VitE为阳性对照〔4〕，各组H2O2均于YLS干预前30min加入。加入药物后继续培养24h，然后收集细胞观察各项指标。　　2.2MTT法测定细胞增殖　　将

7、HSC以1×105/ml培养于96孔板，培养48h，换含药的培养液继续培养24h，每组6孔，各孔加入20μlMTT试剂，轻轻混匀，继续37℃培养4h，吸出全部液体，加200μlDMSO，微量振荡器上振荡15min，待溶解完全，于酶标仪570nm波长比色。　　2.3细胞毒性实验〔5〕LDH比色法检测YLS对HSC-T6的细胞毒性。传一代培养的HSC以5%小牛血清的1640培养液制备为1×105/ml细胞悬液，接种于96孔板，每孔200μl，至细胞长至近单层后，分组后更换含5%小牛血清终浓度不同的YLS的1640培养液，每组

8、6孔。继续培养24h，收集培养上清，按乳酸脱氢酶(LDH)测试盒说明测定培养上清中的LDH活力。　　2.4ELISA法测定上清液I型胶原含量〔6〕将HSC以1×105/ml培养于96孔板，培养48h换含药的培养液继续培养24h后，收集培养上清液。取出酶标板，分别加入培养上清和标准品，每组6孔；每孔加入50μl的酶标记