高效液相色谱法测定安痛藤中羽扇豆醇的含量论文

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1、高效液相色谱法测定安痛藤中羽扇豆醇的含量论文邓鹏谢一辉张叶青余无双【摘要】目的建立安痛藤中羽扇豆醇含量的测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法，色谱柱为diamonsilC18(5μm，250mm×4.6mm)，流动相为甲醇∶水=98∶2,流速1.0ml·min-1，检测波长206nm，柱温为30℃。结果羽扇豆醇在0.316～3.16μg范围内与峰面积有良好线性关系,r=0.9995，平均回收率为97.82%，RSD为2.49%。结论该方法测定安痛藤中羽扇豆醇含量快速、简便、准确、可靠。【关键词】高效液相色谱安痛藤羽扇豆醇安痛藤为葡萄科白粉藤属植物苦朗藤Cis

2、susassamica(LaonsilC18(5μm，250mm×4.6mm;DIKMA公司)；KQ3200型超声仪；羽扇豆醇对照品(自制,归一化含量99.80%)；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为超纯水；安痛藤药材采于江西赣南地区，由江西中医学院刘庆华老师鉴定为葡萄科白粉藤属植物苦朗藤Cissusassamica(LaonsilC18(5μm,250mm×4.5mm)色谱柱,甲醇∶水(98∶2)为流动相,柱温30℃,流速1ml·min-1,检测波长206nm；羽扇豆醇对照品进样量和安痛藤供试液进样量20μl。在上述色谱条件下,羽扇豆醇与其它成分分离良好,理论

3、塔板数以羽扇豆醇峰计算不低于5000；分离度接近于1.5,基本实现基线分离。结果见图1～2。2.2对照品溶液的制备精密称取羽扇豆醇对照品适量，置于25ml量瓶中,.freelg/ml）。2.3供试品溶液的制备取安痛藤粉末(过60目)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40ml，称定重量，超声30min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液20ml，水浴蒸干，用氯仿溶解(2，2，1ml)，合并氯仿液上1.5g硅胶柱，用氯仿洗脱，收集洗脱液8ml，蒸干，用甲醇溶解并定容至2ml，0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。图1羽扇豆醇对照

4、品色谱图（略）图2安痛藤供试液色谱图（略）2.4线性关系的考察精密吸取对照品溶液1，2，4，6，8，10ml置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成浓度为15.8，31.6，63.2，94.8，126.4，158μg·ml-1羽扇豆醇对照品溶液，分别进样20μl。以羽扇豆醇的质量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程为：Y=383.54X+26.066，r=0.9995。结果表明，羽扇豆醇在0.316～3.16μg范围内与峰面积呈良好线性关系。2.5稳定性实验取安痛藤约2g，精密称定，按供试液制备项制备供试液，进样20μl/次，共6次，分别在0，4，8

5、，12，16，24h进样并记录峰面积值。计算结果显示：6次羽扇豆醇含量测定结果基本不变，平均值为0.0162%，RSD=1.20%，表明供试液至少在24h内稳定。2.6精密度实验精密吸取安痛藤供试液，连续进样6次，20μl/次，6次进样测得羽扇豆醇含量平均结果为0.0163%,RSD=1.33%，表明本实验方法精密度良好。2.7重复性实验取安痛藤粉末6份，每份约2g，精密称定，按供试液制备项制备供试液，进样20μl，记录峰面积值。6份样品羽扇豆醇含量平均值为0.0160%，RSD=2.41%，结果表明本实验方法重复性良好。2.8加样回收实验取安痛藤粉末(过60目)6

6、份，每份约2g，精密称定，按供试液制备项制备，在“精密吸取续滤液20ml”后分别精密加入羽扇豆醇对照品溶液1ml（含羽扇豆醇为0.1223mg），继续制得供试液。进样20μl/次，每份供试品溶液进样3次。结果见表1。结果显示，用HPLC法测定安痛藤中羽扇豆醇的含量，回收率结果令人满意。2.9系统适应性实验选择了3种色谱柱：DiamonsilC18(5μm，250mm×4.6mm)，HypersilODS2(5μm，250mm×4.6mm,大连依利特)色谱柱和EclipseXDB-C18(5μm，250mm×4.6mm，安捷伦公司)色谱柱，按本法测定安痛藤药材中羽扇豆

7、醇的含量，测定结果基本一致，均值为0.0162%,RSD为2.49%。表明本法适应性较好。表1加样回收率实验结果（略）2.10样品的含量测定取不同采收期的安痛藤样品按“2.3”项下制备供试品溶液，进样量20μl，测定供试品中羽扇豆醇的含量。结果见表2。表2安痛藤不同采收期羽扇豆醇的含量测定（略）结果显示，不同采收期安痛藤样品中的羽扇豆醇含量存在较大的差异。由于样品来源于山区，受到人为因素的影响较小，主要影响因素可能在于日晒与水分等自然条件。2004,2005,2006年采集的样品中，以20051125采收的羽扇豆醇含量最高。3讨论3.1供试品提取方法的选择羽