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《表没食子儿茶素没食子酸酯测定及其对胃癌细胞增殖的抑制作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、表没食子儿茶素没食子酸酯测定及其对胃癌细胞增殖的抑制作用研究作者：张凤，安利国，李福荣，赵晓民，文今福，杨桂文【摘要】目的分析表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在绿茶提取物中的含量，探讨EGCG对人胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响，为阐明EGCG抗肿瘤作用机制提供实验基础。方法反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定绿茶提取物中EGCG的含量。MTT法检测EGCG对体外培养的人胃癌细胞BGC823增殖的影响;DNAladder法检测EGCG处理各组DNA梯度的变化。所有数据均采用SPSS12.0进行统计分析，均数比较采
2、用t-test。结果通过绘制标准曲线确定绿茶提取物中EGCG的含量为9%。MTT法检测结果显示EGCG能够呈现剂量(5×10-3,1×10-2,2×10-2,4×10-2)g/L依赖性地抑制人胃癌细胞BGC823的增殖;DNAladder法显示EGCG处理组细胞DNA呈现梯状条带，而对照组则没有这种带纹。结论绿茶提取物中EGCG的含量为9%;EGCG能够通过诱导细胞凋亡而抑制人胃癌细胞BGC823的生长和增殖。【关键词】反相高效液相色谱;表没食子儿茶素没食子酸酯;胃癌细胞;细胞凋亡 Abstract：ObjectiveTo
3、analyzethecontentofEpigallocatechingallate(EGCG)ingreenteaextractionandtoinvestigatetheeffectofEGCGontheproliferationandapoptosisofhumangastriccancercellsBGC823culturedinvitro,entalbasisforclarifyingthemechanismofantitumoreffectofEGCG.MethodsIntheconditionofmobilep
4、hasedoubledistilledl/min,RP-HPLCChromatogramangastriccancercellsBGC823culturedinvitroofthecellsineachgroupinedbyMTTmethod.DNAladderassayedbySPSS12.0andttesteanvaluebetenteasuredbyMTTassay,cellviabilitydecreasedinadose-(5×10-3,1×10-2,2×10-2,4×10-2g/L)dependentmanner
5、(shoa公司);RPMI1640干粉(GIBCO);小牛血清(四季青生物工程材料有限公司);噻唑蓝(MTT)(Sigma公司);青霉素(北京鼎国生物技术发展中心);链霉素(北京鼎国生物技术发展中心);二甲基亚砜(DMSO)(Sigma公司);高效液相色谱分析仪(HPLC)(美国Agilent公司);荧光显微镜(LEica);DYY-6C型电泳仪(北京六一仪器厂);微波炉(广东顺德);Model550酶标仪(BIO-RAD美国);凝胶成像系统(Tu-20，美国)。 2方法 2.1高效液相色谱法测定绿茶中EGCG含量 2
6、.1.1高效液相色谱条件色谱柱为C18，监测器：紫外监测波长(280nm);流动相为双重蒸水/乙腈/乙酸乙酯(86∶12∶2V/V/V)，流速：1.0ml/min。 2.1.2标准曲线的绘制准确称取EGCG0.0100g，用双蒸水溶解于10ml容量瓶中，经微孔滤膜过滤作为母液，通过梯度稀释得到终浓度为(0.0050，0.0025，0.0013，0.0006，0.0003)g/ml的EGCG待测溶液。 2.1.3样品中EGCG含量的测定准确称取绿茶提取物0.0100g，用双蒸水溶于10ml容量瓶中，经微孔滤膜过滤作为待测样
7、品。 2.2细胞培养及MTT法检测细胞增殖情况BGC823细胞株购自山东省医学科学院，置于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养体系中，在37℃，50ml/LCO2的饱和湿度培养箱中培养。 取对数生长期的胃癌细胞BGC823以5×107/L浓度接种于96孔培养板,每孔100μl,37℃,50ml/LCO2培养箱中培养。24h后分别接入不同浓度的无菌EGCG溶液100μl,使最终浓度分别为5×10-3,1×10-2,2×10-2,4×10-2g/L,各组设8个重复孔,对照组加100μl培养液,在37℃,50ml/LCO2
8、条件下继续培养48h。实验终止前加入新配制的5g/L的MTT溶液20μl,混匀,再继续培养4h.弃去上清液,每孔加DMSO200μl,充分振荡30min,溶解MTT沉淀物,490nm测定每孔的吸光度A值。计算抑制率:抑制率(%)=(1-实验组A值/对照组A值)×100%。 2.3DNA梯
