绿茶提取物及表没食子儿茶素没食子酸酯对免疫细胞的作用研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果绿茶提取物及表没食子儿茶素没食子酸酯对免疫细胞的作用研究作者：张凤，杨桂文，张福淼，赵静，崔英杰，安利国【摘要】　　目的研究绿茶提取物和表没食子儿茶素没食子酸酯对脾脏细胞增殖和巨噬细胞NO分泌的影响。方法采用MTT法检测脾脏细胞增殖变化，用Griess试剂法检测NO产量的变化。结果绿茶提取物和EGCG都能够促进脾脏细胞增殖，并能够协同conA刺激脾脏细胞的增殖；还能够抑制LPS激活的巨噬细胞的NO产量。结论绿

2、茶提取物和EGCG具有免疫调节和减轻炎症反应的有益作用。【关键词】绿茶表没食子儿茶素没食子酸酯免疫细胞Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofgreenteaextractandEpigallocatechingallateonspleencellproliferationandmacrophageNOassaywasusedtodetectspleencellproliferationchangeandGriessreagentmethodwasusedtodetectmacrophageNOsecreti

3、on.ResultsGreenteaextractandEGCGcouldpromotespleencellproliferationandbeabletocooperatewithconAtostimulatespleencellcouldalsoinhibitLPS-activatedmacrophagesteaextract课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解

4、，特别是博士生必须有创新性的成果andEGCGhaveimmunoregulativeeffectandcanalleviateinflammatoryreaction.Keywords：Greentea;EGCG;Immunecells　　现代研究表明绿茶具有抗氧化、抗癌和防癌、降血糖、抑菌和抗病毒等生物学活性［1～5］。在人们日益注重保健养生的今天，绿茶的系列生物学活性无疑也成为研究的热点。本实验选用山东日照绿茶为材料，用70％乙醇法抽提得到绿茶提取物，研究其对免疫细胞的作用。　1器材　　昆明种小鼠。EGCG；绿茶提取物；RPMI164

5、0干粉；小牛血清；噻唑蓝；青霉素、链霉素；ConA；LPS；DMR显微镜；MCO-17AC二氧化碳培养箱。　　红细胞裂解液：NHCl.2g，KHCO1g，。将以上试剂溶解于800ml三蒸水，充分搅拌溶解混匀后，用1N的盐酸调pH值至～，加水补足到1000ml。过滤除菌，4℃保存备用。　　Griess试剂：A液：对氨基苯磺酰胺，10％醋酸150ml；B液：α－萘胺g，三蒸水20ml，10％醋酸150ml，冰箱中保存，使用前A液B液等体积混合。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰

6、当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果方法.1MTT法测定小鼠脾脏细胞的增殖取实验小鼠，脱颈处死。无菌条件下取出脾脏，剪碎，200目尼龙网过滤。收集的细胞以无血清RPMI1640培养液洗涤两遍，收集后加红细胞裂解液，中止裂解后收集细胞，以无血清RPMI1640培养液洗涤两遍，重悬细胞于RPMI1640培养液中。调整脾脏细胞浓度为，置于96孔板中，绿茶提取物或EGCG作用4h及绿茶提取物或EGCG与ConA共作用4h。实验终止前h每孔加M

7、TT(mg/ml)0μl，离心，弃上清液中止反应，每孔加150μl二甲基亚砜，轻轻摇动30min溶解紫色结晶，490nm波长酶标仪比色。　　SI=ConA刺激后A值/未加刺激A值.2Griess’S法测定巨噬细胞产量NO的定量可通过测定NO2-和NO3-的总和来实现，根据这一原理，应用Griess’S试剂来定量检测NO水平。巨噬细胞培养上清与Griess’S试剂室温下反应10min，于490nm处检测吸光值。结果.1MTT法测定小鼠脾脏细胞的增殖.课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件

8、等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果绿茶提取物对小鼠脾脏细胞增