绿茶提取物及表没食子儿茶素没食子酸酯对免疫细胞的作用研究论文

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1、绿茶提取物及表没食子儿茶素没食子酸酯对免疫细胞的作用研究论文张凤，杨桂文，张福淼，赵静，崔英杰，安利国【摘要】目的研究绿茶提取物和表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对脾脏细胞增殖和巨噬细胞NO分泌的影响。方法采用MTT法检测脾脏细胞增殖变化，用Griess试剂法检测NO产量的变化。结果绿茶提取物和EGCG都能够促进脾脏细胞增殖，并能够协同conA刺激脾脏细胞的增殖；还能够抑制LPS激活的巨噬细胞RAethodsMTTassayethodacrophageNOsecretion.ResultsGreenteaextractandEGCGcouldpromotespleencellprolife

2、rationandbeabletocooperateulatespleencellproliferation.TheycouldalsoinhibitLPS-activatedmacrophagesRAI1640干粉（GIBCO）；小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；噻唑蓝（Sigma）；青霉素、链霉素（北京鼎国生物技术发展中心）；ConA（Sigma）；LPS（Sigma）；DMR显微镜（Leica）；MCO-17AC二氧化碳培养箱（SANYO；Model550酶标仪（BIO-RAD）。红细胞裂解液：NH4Cl8.29g，KHCO31g，EDTANa37.2mg。将以上试剂溶解于80

3、0ml三蒸水，充分搅拌溶解混匀后，用1N的盐酸调pH值至7.2～7.4，加水补足到1000ml。过滤除菌，4℃保存备用。Griess试剂：A液：对氨基苯磺酰胺0.5g，10％醋酸150ml；B液：α－萘胺0.1g，三蒸水20ml，10％醋酸150ml，冰箱中保存，使用前A液B液等体积混合。2方法2.1MTT法测定小鼠脾脏细胞的增殖取实验小鼠，脱颈处死。无菌条件下取出脾脏，剪碎，200目尼龙网过滤。收集的细胞以无血清RPMI1640培养液洗涤两遍，收集后加红细胞裂解液，中止裂解后收集细胞，以无血清RPMI1640培养液洗涤两遍，重悬细胞于RPMI1640培养液中。调整脾脏细胞浓度为（2×106c

4、ells/ml），置于96孔板中，绿茶提取物或EGCG作用48h及绿茶提取物或EGCG与ConA（20μg/ml）共作用48h。实验终止前4h每孔加MTT(5mg/ml)20μl，离心，弃上清液中止反应，每孔加150μl二甲基亚砜，轻轻摇动30min溶解紫色结晶，490nm波长酶标仪比色。SI=ConA刺激后A值/未加刺激A值2.2Griess’S法测定巨噬细胞RATT法测定小鼠脾脏细胞的增殖3.1.1绿茶提取物对小鼠脾脏细胞增殖的影响MTT法检测绿茶提取物对小鼠脾脏细胞增殖的影响，结果表明它不仅能刺激脾脏细胞增殖，而且也能协同ConA刺激脾脏细胞的增殖。见图1～2。3.1.2EGCG对小鼠脾

5、脏细胞增殖的影响MTT法检测EGCG对小鼠脾脏细胞增殖情况表明：EGCG体外也能够刺激脾脏细胞的增殖，并协同ConA刺激脾脏细胞增殖。见图3～4。3.2Griess’S法测定巨噬细胞RAC,KimJH,etal.EffectsofaTetramethoxyhydroxyflavonep7FontheExpressionofInflammatoryMediatorsinLPS-treatedHumanSynovialFibroblastandMacrophageCells［J］.JMicrobiolBiotechnol，2008,18(4):686.［10］DongL,,etal.Theacti

6、vationofmacrophageandupregulationofCD40costimulatorymoleculeinlipopolysaccharide-inducedacutelunginjury［J］.JBiomedBiotechnol，2008:852571.