小鼠心肌组织裂解上清液诱导小鼠骨髓瘤sp2-0细胞凋亡论文

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1、小鼠心肌组织裂解上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡论文王玮，张文艳，吴建军，类延花，金晶，方草晖，胡勇，王明丽【关键词】心肌上清液ApoptosisofmousemyelomaSp2/0cellsinducedbysupernatantofmousecardiacmusclelysate【Abstract】AIM:TostudytherolesofmousecardiacmusclelysatesupernatantininducingtheapoptosisofmousemyelomaSp2/0cells.METHODS:Variousconcent

2、rations(1∶6,1∶12,1∶24)ofmousecardiacmusclelysatesupernatantandcyclophosphamideicroscopeorphologicalchangesofSp2/0cellsandapoptosisrateinedbyfloetryafter48h.MorphologicalchangesofSp2/0cellscoculturedousecardiacmusclecellsousecardiacmusclelysatesupernatant,liverlysatesupernatant,thy

3、muslysatesupernatantandcyclophosphamide,andthenthedifferenceofapoptoticrateamongthemusclelysatesupernatantcouldinducetheapoptosisoftheSp2/0cellsandtheapoptoticrateincreasedinaconcentrationdependentmanner,butthereousecardiacmusclelysatesupernatantgroupandcyclophosphamidegroup.After

4、a10hourcocultureousecardiacmusclecelllysate,theapoptosisofafeousecardiacmusclelysatesupernatant,.freeluslysatesupernatantcouldallinduceapoptosisoftheSp2/0,HeLa,Hep2andVerocells.Buttheeffectofthemousecardiacmusclelysatesupernatantoreobviousandpermanent.CONCLUSION:Themousecardiacmus

5、clelysatesupernatantcansignificantlyinduceapoptosisofmousemyelomaSp2/0cells.【Keyusclelysatesupernatant;apoptosis;mousemyelomaSp2/0cell【摘要】目的:研究小鼠心肌上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡的作用.方法：在Sp2/0细胞培养孔中.freelL/L胎牛血清＋DMEM液为培养液，按本室常规方法在CO2温箱中培养；乳鼠心肌细胞培养：取Balb/c新生红皮乳鼠20只，在无菌操作下取出心脏，用PBS冲洗3遍，以眼科剪剪成1mm

6、3碎块，洗涤，后加2.5g/L胰蛋白酶液37℃消化20min，吹打3次，吸取上层细胞悬液，以同样的方法消化3次，直到组织块完全消化为止，以1500r/min离心8min，细胞沉淀用200mL/L胎牛血清的DMEM培养液制成细胞悬液，接种到培养瓶内，放置于50mL/LCO2温箱，待用；组织上清液的制备：取Balb/c小鼠20只，麻醉后在无菌操作下取出心脏、肝脏和胸腺组织，用PBS30mL反复冲洗，碾磨，收集组织细胞悬液在Ep管中，放置-80℃冰箱，约1h后取出，在室温下溶解；再放入-80℃冰箱中，如此反复冻融3次，使组织细胞充分裂解，在离心机中以5000r/

7、min离心30min，吸取上清液，用紫外分光光度计分别测其蛋白浓度后，再将浓度统一调至2.23g/L，然后保存在-20℃冰箱，待用.1.2方法6孔板培养心肌上清液、环磷酰胺诱导Sp2/0细胞凋亡.在Sp2/0细胞6孔培养板上，取2孔分别滴加心肌上清液1mL，取3孔分别滴加环磷酰胺200μL（0.4mg）,100μL（0.2mg），24h后观察结果.24孔板培养心肌上清液、环磷酰胺诱导Sp2/0细胞凋亡.取21孔培养Sp2/0细胞，分别滴加不同浓度的心肌上清液和环磷酰胺，另取3孔作为空白对照，48h后流式细胞仪检测凋亡细胞的比例（每浓度取3孔）.心肌细胞培养

8、15d吸取Sp2/0细胞培养液1mL，加入心肌细胞培养瓶内，观察心