大鼠肾阴阳虚模型建立方法

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1、大鼠肾阴阳虚模型建立方法【摘要】复制大鼠肾阴阳虚模型。方法：甲状腺抑制剂丙基硫氧嘧啶（PTU）大鼠灌胃，甲状腺素片灌胃。结果：大鼠出现中医肾阴阳虚证候的临床表现，肾阳虚组大鼠cAMP/cGMP比值较阴虚组下降，阴虚组比值较空白组明显升高。结论：利用丙基硫氧嘧啶制造大鼠肾阳虚模型，用甲状腺素片制造阴虚大鼠模型是可行的。【关键词】模型动物大鼠肾阴虚肾阳虚　　近年来随着中医药事业的迅猛发展，在中医药科研中模拟中医临床证候的动物病理模型的建立越来越重要。最早建立的肾阳虚模型是祁广教授的氢化可的松动物模型，其后各种中医证候模型的建立方法相继出现，本实验主要是研究甲状腺激素抑制剂丙基硫氧嘧啶

2、建立肾阳虚动物模型，甲状腺素片建立肾阴虚动物模型的可行性。1实验材料1.1实验动物P升高，因此抑制动物甲状腺功能造成的阳虚动物模型，可摸拟人类的阳虚症。　　样本处理：实验第4周取血，各组大鼠取静脉血各2mL，离心机3500r/min分离血清测试。　　检测方法：用放射免疫法测定血清中T3、T4含量。表33组大鼠T4比较表43组大鼠T3比较注：与空白组比较，阳虚组下降△P<0.05，阴虚组明显升高△△P<0.01，阳虚组较阴虚组明显降低##P<0.01。血清甲状腺素T3、T4含量升高或有一项升高，反映甲状腺轴有一定程度的功能紊乱。阳虚模型的甲状腺中T3，T4含量下降。

3、阴虚模型则相反，实验数据说明模型复制成功。3.5cAMP、cGMP比较血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)是一对相互拮抗而又相互制约的物质，它们对细胞功能处于稳定状态具有双向控制调节作用，与祖国医学的阴阳学说有相似之处，多数研究结论认为血浆环磷酸腺苷升高，说明机体处于一种阴虚状态，反之则是阳虚状态。因此cAMP/cGMP的比值升高则阴虚，反之为阴虚［6］。样本处理：第4周取静脉血1～2mL，注入含DETA抗凝剂50μL的试管中，摇匀，1h内离心，4℃，2000r/min离心10min。分离血浆，-20℃保存，严禁反复冻融。取0.1mL血浆，加入2mL无水乙醇，振摇1m

4、in，静置5min，3000r/min离心10min。将上清液倒入指形管或者青霉素小瓶，残渣再加入75％乙醇1mL，匀浆，3000r/min离心10min。合并上清液，于60℃烤箱中吹干，残渣放入4℃冰箱保存。测量时用1mL醋酸缓冲液溶解，然后取0.1mL测量，此时稀释倍数为100。检测方法：用放射免疫法测定血浆中cAMP、cGMP含量。检测结果见表5，表6，表7。表5各组大鼠cAMP比较注：与空白组比较，阳虚组无差异，阴虚组明显升高#P<0.01。阳虚组较阴虚组明显降低△P<0.01。表6各组大鼠cGMP比较注：与空白组比较无差异，阳虚组较阴虚组无差异。表7各组大鼠c

5、AMP/cGMP比较（注：与空白组比较，阳虚组无差异，阴虚组明显升高#P<0.01。阳虚组较阴虚组明显降低△P<0.01。通过检测可以看出28d时，阴虚组大鼠血浆cAMP较空白组明显升高，cGMP无明显差异。阳虚组大鼠无差异。本实验中阳虚模型组比值与空白组无差异，较阴虚模型组明显降低，阴虚模型组较空白组显著升高，提示阴虚模型组基础代谢率升高，阳虚组基础代谢率相对较低符合其模型表现。3.6结果分析从实验结果来看，阳虚组大鼠体重、体温明显下降，一般状态表现符合中医肾阳虚的表现，阴虚组大鼠体重下降，体温升高，一般状态表现符合中医肾阴虚表现，实验室测试表明，阳虚组cAMP/cG

6、MP值较阴虚组明显下降［47］，提示阳虚组大鼠基础代谢率较阴虚组大鼠明显下降，结果表明模型复制基本成功。上述实验结果表明，通过甲状腺激素轴的调解来复制动物阴虚、阳虚模型是可行的，有效的，可以进行进一步研究。4讨论中医证候模型的复制是现在中医学发展的一个难题，随着中医现代化进程的深入，这个问题越来越受到国内外医家的重视，本实验在总结前人经验的基础上，从甲状腺激素轴调解的角度来复制中医肾阳虚、肾阴虚模型。从实验结果观察，本实验所复制的模型在临床表现上符合中医肾阴、阳虚的表现，实验室检测cAMP/cGMP比值也符合模型的要求。总体来看从甲状腺激素调解的角度来复制中医肾阴、阳虚动物模型是

7、可行的，同时本实验也存在一定的不足，如造模方法与中医证候形成的原因不同，模型成功的评价标准等问题还有待进一步研究。【参考