构建方法的异同对肾阳虚大鼠模型的影响差异

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1、构建方法的异同对肾阳虚大鼠模型的影响差异　　肾阳虚大鼠模型是研究中医阴阳学说和补阳药物作用机制的重要手段，它需要符合中医肾阳虚典型症状，如精神萎顿、体毛干枯不齐、反映迟钝等。历来建模方法各式各样，然缺乏比较分析，不同建模方法对大鼠的病理生化产生不同的影响，如腺嘌呤构建的肾阳虚模型同时也会影响生育，适合研究不育症。因此，不同建模方法对于中药药效评价和机制研究也不同。探索简便有效的肾阳虚大鼠建模方法，明确其病理生化变化，对药效学研究及机制探讨具有重要作用。本文报道腺嘌呤和氢化可的松构建的肾阳虚大鼠模型肾脏睾丸及SU、Cr、

2、SOD、MDA的变化，供研究参考。　　1　材料和方法　　1.1材料　　1.1.1实验动物　SPF级雄性SD大鼠21只，体重180～200g，：广州中医药大学实验动物中心，许可证号SCXK(粤)2013-0020。　　1.1.2主要试剂及仪器　未提纯的腺嘌呤Ameresco(生产批号：20130325)，广州华奇盛生物科技有限公司，氢化可的松(100mg/20mL，生产批号：1106021)，天津金耀氨基酸有限公司。总超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(DA)测定试剂盒(TBA法，货号：A003-1，生产批号：20141

3、2)、RatAdrenocorticotropicHormone(ACTH)Elisa测定试剂盒(生产批号：201412)，南京建成生物工程研究所。BX-51型病理图像采集系统(日本奥林巴斯公司)。LabsystemsFinnpipette100μL单道移液器;Thermo50μL8道移液器;HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);华东电子DG5033A酶标仪(南京华东电子集团医疗装备有限责任公司)。　　1.2　实验方法　　1.2.1　分组与造模　按随机数字表法把动物分为3组：空白组(7只)大鼠按2mL

4、/只皮下注射生理盐水，连续10d。腺嘌呤组大鼠(7只)皮下注射未提纯腺嘌呤，剂量0.2g/(kgd)，连续10d。氢化可的松组大鼠(7只)大腿内侧肌肉丰厚处注射氢化可的松25mg/(kgd)，连续13d。　　1.2.2　一般情况　观测大鼠的活动度、对外界反应的灵敏度、皮毛光泽、饮食、饮水、死亡情况。　　1.2.3　大鼠自主活动度　实验结束后，将大鼠投入干净饲养盒中，适应3min后，计算各鼠2min内的自由活动时间。　　1.2.4大鼠游泳时间　自主活动度测量结束后，将大鼠放入盛满常温水的水箱中，测量大鼠放入到开始下沉的时

5、间为游泳时间。　　1.2.5标本的采集与制备　经过12h后，摘眼球取血，血液常温放置1h后4℃离心机3000r/min10min离心，取血清。大鼠颈椎脱臼处死，取肾脏睾丸观察并称重，把肾脏睾丸用10%甲醛溶液固定并放至-20℃冰箱保存，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下进行组织病理学检查。　　1.2.6　指标测定　血清尿素采用脲酶-波氏比色法，血清肌酐采用苦味酸速率法，均通过测定吸光光度值计算。血清SOD水平采用TBA法，通过测定OD值计算;血清MDA水平采用DA活力与空白组比较，腺嘌呤组大鼠血清肌酐、SOD和

6、MDA活力均增高(P<0.05)，氢化可的松组大鼠血清肌酐、SOD活力均降低(P<0.05)，MDA活力增高(P<0.05);且氢化可的松组血清肌酐和SOD活力均比腺嘌呤组低(P<0.05)。　　3　讨论　　阳虚动物建模需要与临床复杂的证候相一致，构建符合临床实际的动物模型对于方药研究有着重要作用。肾阳虚动物模型作为研究补阳药物或方剂的重要手段，目前诊断标准主要采用《中医虚证辨证参考标准》，依据动物的外观、行为等来评判其吻合程度，以确定模型成功与否。本研究发现腺嘌呤或氢化可的松建模，动物均表现出

7、疲倦，饮食量少，体重减轻，体毛稀疏无光泽，反应迟钝，自主活动度降低，游泳时间短等症状，中医认为此乃阳气不振，阴寒内盛，神失所养。阳气不振，温煦推动功能减弱，血脉运行不畅，经络失养，发于皮毛则体毛稀疏无光泽;影响运化之力，则饮食量少，体重减轻;无力升腾，则神失所养，疲倦萎靡。《黄帝内经》提到阳主动，阴主静，因此，自主活动度减少，游泳时间减少乃机体阳虚状态。故两种建模方法从临床表现和行为上，均符合肾阳虚证。血清肌酐(Cr)由外源性和内源性组成，当肾实质损害，肾小球滤过率(GFR)降低到正常的1/3时，Cr就会明显上升;尿素

8、是蛋白质代谢的终末产物之一，在肝中经鸟氨酸循环生成，进入血液循环由肾脏排泄，当肾实质受到损害时，GFR降低，血清尿素(SU)浓度升高。　　本研究发现，腺嘌呤组大鼠肾脏出现肾皮质略微固缩，肾小管管腔变窄，肾间质水肿、充血伴明显的炎性细胞浸润等病理变化，同时与空白组比较，Cr水平明显升高，SU有升高趋势，说明腺嘌呤建模会影响肾小球滤过