血管端端吻合法建立双侧供肾大鼠肾移植模型

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1、血管端端吻合法建立双侧供肾大鼠肾移植模型【关键词】静脉吻合肾移植动物模型大鼠大鼠肾移植模型是研究移植免疫排斥反应及各种药物对移植肾影响的重要动物模型。Pahlavan等[1]认为对于大鼠肾移植模型，肾动脉端端吻合是金标准，最为推荐肾静脉端端吻合。目前，国内尚无不阻断腹主动脉和后腔静脉血流的血管端端吻合双侧供肾大鼠肾移植模型的相关报道。我们参阅相关文献，成功建立了无需阻断腹主动脉、后腔静脉血流，无需支架支撑血管壁的一种血管端端吻合双侧供肾大鼠肾移植模型，为移植排斥反应、移植免疫耐受等研究提供了一个简便、经济、省时的方法

2、。1材料和方法1.1材料1.1.1实验动物受体、供体均为清洁级健康雄性SD大鼠，购自中国科学院上海动物研究所，平均体质量（275±25）g。1.1.2手术器械HCX803显微外科手术器械（宁波市成和显微器械厂），90医用无损伤缝合线，显微外科血管夹，SXP1双人双目外科手术显微镜（上海医用光学仪器厂），0.9×30静脉套管留置针，无菌冰盒，冲洗针，婴儿腹壁撑开器等。1.1.3药品1%氯胺酮溶液、125U·ml-1肝素钠生理盐水溶液、含肝素钠林格液（4℃）、青霉素钠针剂、碘伏、0.25%利多卡因+0.2%罂粟碱生

3、理盐水溶液。1.2方法1.2.1麻醉及术前处理供体术前无需禁食、禁水，受体术前12h禁食不禁水，供、受体均以1%氯胺酮溶液按1ml·（100g）-1腹腔注射麻醉。1.2.2供体手术麻醉成功后固定，碘伏常规消毒，腹正中十字切口，4线牵拉固定。湿盐水纱布包裹胃、肠、脾置右侧腹腔外。采用水分离法[2]游离左肾及其动、静脉，游离腹主动脉和后腔静脉，前至主动脉裂孔和肝脏，后至腹主动脉分叉前方，除去血管周围脂肪和结缔组织；同法分离出右肾及肾动、静脉。于肾静脉后方向后游离输尿管，直至膀胱，暴露输尿管膀胱连接处。以输尿管开口为中心切

4、取半径约3mm的膀胱瓣。于腹主动脉分叉处头侧包绕主动脉和后腔静脉预置1根0号丝线，肾动脉前方1cm预置2根0号丝线，分别包绕主动脉及后腔静脉。结扎、切断肠系膜上动脉，结扎、切断肾上腺动、静脉并留标记尾线。经阴茎背静脉注入肝素125U后，分别结扎预置线，于腹主动脉分叉结扎线近心端插入静脉留置针，以4℃含肝素钠林格液灌洗双侧肾脏，灌注压力保持在80cmH2O（7.85kPa)，至双肾成均一浅土黄色、双肾静脉流出液清亮为止，迅速用冰屑覆盖双肾。齐主动脉壁处剪断左右肾动脉，齐后腔静脉管壁处剪断左肾静脉，平左肾静脉前缘及后腔静

5、脉结扎线前方剪断后腔静脉，并将其修剪成右肾静脉的一部分。右肾静脉和后腔静脉的距离非常短，因不能很好的固定血管夹以至于行原位右肾静脉的端端吻合非常困难；又因大鼠肾静脉直径与后腔静脉直径相近，故我们将后腔静脉的一部分修整为肾静脉的一部分以延长右肾静脉，并将右肾放置左肾窝处，以便行右肾移植及肾静脉的端端吻合术。供肾置于盛有0～4℃肝素生理盐水的无菌冰盒中。1.2.3受体手术碘伏消毒，经正中切口进腹；肠、胃、脾用湿盐水纱布保护推向右上腹，充分暴露左肾及左肾动、静脉，固定。水分离法仔细解剖肾门处血管至后腔静脉、腹主动脉，充分显

6、露左肾动、静脉及左肾上腺动、静脉；结扎、切断左肾上腺动、静脉并留标记尾线。近后腔静脉和腹主动脉的肾动、静脉处，血管夹阻断已游离的肾动、静脉，近肾门标记线外侧远端剪断肾动、静脉，肝素钠盐水冲洗血管断端及管腔内残存的血液，移除左肾（图1）。供肾置于受体左肾窝处、冰屑纱布覆盖。在10倍显微镜下先吻合静脉再吻合动脉。以肾上腺动脉断端标记线为缝合第一针的进针标志，行肾动脉两定点间断端端吻合，缝合8～10针；供、受体肾静脉三定点间断端端吻合，由于肾静脉较薄且易粘贴，故在肾窝处喷入生理盐水以将受、供体肾静脉浸入生理盐水，将肾上腺静

7、脉断端标记线向头侧放置（右肾将后腔静脉结扎线结摆向头侧）；轻抖生理盐水中静脉管壁数次，静脉壁会自动散开，显露出静脉断端和管腔，以标记线为吻合标志，缝合12～16针（图2～4）。吻合完毕后，先用血管夹钳夹肾门血管，撤去肾静脉血管夹检查静脉吻合口，再撤去肾动脉血管夹检查动脉吻合口，待检查满意后，再开放肾门血管夹（图5、6），数秒内可见移植肾实质迅速充盈变红。动、静脉吻合口出血时可用小棉球持续轻压片刻，一般渗血均能停止，必要时补针。固定移植肾。切开膀胱侧壁2～3mm，理顺输尿管，行输尿管膀胱瓣膀胱外隧道式吻合；受体右肾血管

8、预置体外结扎线。1.2.4术后处理术毕，移植大鼠肌肉注射青霉素（50U·g-1）；经阴茎背静脉按需足量补液。移植大鼠麻醉清醒后，即可进食。术后3d，体外结扎右肾预留结扎线。3讨论大鼠肾移植模型为移植免疫学研究的重要工具。目前，国内外大多采用单侧供肾进行肾移植动物模型建立，应用双侧供肾者尚不多见。Yin等[3]于1994年首次采用供肾动脉带主动脉