nogoa在脑缺血再灌注白质损伤中的表达及其意义论文

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1、NogoA在脑缺血再灌注白质损伤中的表达及其意义论文高晓玉王得新张拥波【摘要】目的检测脑缺血再灌注后不同时间点轴突生长抑制因子NogoA在损伤白质区的基因表达，探讨NogoA与缺血再灌注白质损伤的可能关系。方法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型，实时定量聚合酶链反应方法(RelativeQuantificationPCR,RQPCR)检测各时间点NogoA在损伤白质区域的基因表达。结果在损伤白质区域，NogoA基因表达在缺血再灌注1d时表达量开始减少(与假手术组相比，P0.05)，

2、7d时降至最低，14～21d表达量开始上调，21d时仍低于假手术组水平(与假手术组相比.freelatterafterfocalcerebralischemiareperfusion(I/R)inrats,andexploretherelationshipbetatterlesionsafterischemia.MethodsSpragueDaaleratsiddlecerebralarteryocclusion(MCAO).RelativequantificationPCR(RQPCR)edto

3、examinetheexpressionsofNogoAgeneatdifferentreperfusiontime.ResultsTheexpressionlevelofNogoAgeneintheattergroup),andgroup(P0.001).ConclusionsNogoAexpreesionhasdynamicchangesintheatterafterfocalcerebralI/R.NogoAcouldbeasoneofthetargetsforneuroprotectiv

4、etherapyaftercerebralischemia.【Keyia;NogoA;CAO)大鼠注射抗NogoA的单克隆抗体中和其作用,可以使轴突分支及树状棘的密度增加,即使给正常大鼠注射,也能产生短暂的轴突过度生长的现象〔6〕。这说明NogoA在一定程度上可以限制轴突再生。NogoA的发现,为中枢神经系统的损伤修复带来了新的希望。而目前有关NogoA与缺血再灌注白质损伤的关系并不清楚。本实验利用大鼠MCAO模型，观察再灌注损伤后NogoA基因在损伤白质区域表达的时空变化规律，以探讨Nog

5、oA与缺血性脑白质损伤的可能关系。1材料与方法1.1动物成年健康雄性SpragueDain再灌流6、12h、1、3、7、14、21d组，每组6只，用于实时定量聚合酶链反应(RQPCR)的检测。另取6只作为假手术组，假手术组除插线长度为15mm外，余步骤同实验组。参照ZeaLonga5分制评分标准〔8〕,待大鼠麻醉清醒后进行评分，剔除评分为0分或4分的大鼠。每组大鼠在规定的时间点取材，假手术组于手术后1d取材。以10%水合氯醛(0.6ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠，立刻断头，冰上取右脑，切去距离额极、枕

6、极各2mm的脑组织，剩余部分分离出白质区域后液氮速冻后-80℃冻存，用于RQPCR检测。1.3RQPCR检测NogoA基因用Prime5.0软件设计引物,.freel.nih.gov/BLAST)避免扩增的序列存在非特异性，用oligodemo软件测试序列无引物二聚体形成。实验步骤如下：RNAprep动物组织总RNA提取试剂盒(TiangenBiotechCO,LTD)提取总RNA，琼脂糖凝胶电泳，鉴定提取RNA质量，采用ProtoScriptTM第一链cDNA合成试剂盒(购自Neastermix购

7、自AppliedBiosystems，USA)：RQPCR在96孔聚丙烯反应板上、置于实时PCR仪上进行，每个样品均重复3次。按以下反应体系进行：2×SYBRGreenmastermix10μl，上游引物0.25μl，下游引物0.25μl，模板1μl，加不含RNA酶的水至反应体系为20μl，短暂离心后进行扩增，反应条件：50℃2min，95℃10min，95℃15s，60℃1min后两步共进行50次。反应结束后，进行熔解曲线分析，反应条件为95℃15s，60℃20s，95℃15s，全部反应结束后，由电

8、脑自动分析并计算结果。1.4统计学处理应用SPSS11.5统计软件，所有数据均以x±s表示，采用方差分析比较各组变量的差异。2结果NogoA基因表达于缺血再灌注1d时降至假手术组的84%(P0.05)，7d时降至最低点，为假手术组的30%，14～21d时表达量开始上调，21d时表达量上调至假手术组的66%(P0.001)，但仍明显低于假手术组。见图1。