悦目金蛛粗毒的提取和制备

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1、悦目金蛛粗毒的提取和制备作者：陈连水，张浩，袁凤辉，毛月祥，曹宁，朱茫【摘要】目的了解掌握悦目金蛛生活习性和形态特征，分析毒腺形态与体量的相关性，优化明确制毒路线，获得较纯生理活性较高的蜘蛛粗毒。方法通过毒腺形态解剖，借助数理统计方法分析了毒腺形态与蜘蛛体量的相关性；采用毒腺解剖法直接获取性质稳定和最多量的蛛毒粗品，以鸡红细胞为模型检验了粗毒效价，探索了毒素离子通道抑制类型。结果毒腺重量与体量呈正相关，按照优化后的制备方法和技术线路，制得5mg悦目金蛛粗毒；悦目金蛛毒素有促进红细胞凝集和裂解作用，在钙离子环境下毒素对红细胞的裂解作用更强。结论利用毒腺解剖法能够获得最大量更高纯度的蛛毒，初步确定

2、了蛛毒当中含有凝集素和磷脂酶两种成分。【关键词】悦目金蛛；毒腺解剖；粗毒；细胞毒理ChinaAbstract：ObjectiveHavingadetailedmasteryabouttheArgiopeamoena'smorphologicalcharacteristicsandlivinghabits,izedmethodorepurevenom.Methodsorequalifiedvenomcanbegotbyvenomglanddissection.yofvenom;Crudetoxin;Cellphysiology蜘蛛是害虫的重要天敌，以其毒素麻痹杀死猎物。蜘蛛毒素成分复杂，主要为蛋

3、白质和多胺类物质，蛋白质包括各种多肽神经毒素、细胞毒素、酶、激肽类似物、凝集活性肽和抗菌肽等，多胺类物质有ATP、核苷酸、氨基酸、多胺、单胺类等低分子量物质和无机盐等。蜘蛛毒素具有多种活性，现已证实含有多种特异性多肽配体，可以选择性地和K+、Na+、Ca2+通道的亚型相结合［1～11］。国内梁宋平等［12］对虎纹捕鸟蛛、海南捕鸟蛛和广西大疣蛛的毒素进行了较深入的研究。悦目金蛛Argiopeamoena隶属于蜘蛛目园蛛科金蛛属，体中大型，为结网蜘蛛，在我国南方各省均有分布，多出没于夏秋季，以卵袋越冬［13］。由于悦目金蛛多生活在植被繁茂的山区，不易饲养，故关于悦目金蛛毒素的研究少有报道。　　1仪

4、器与材料　　1.1仪器　　上海精密A1004电子天平，OlympusCX41显微摄像系统，上海新苗DNP-9052BS-Ⅲ电热恒温培养箱和DHG-9073BS-Ⅲ恒温鼓风干燥箱，湖南星科TGL-16B台式高速离心机，江苏昆山KQ-50DB数控超声波清洗器，北京泰克0610-403体式显微镜，日本三丰560-108NK20游标卡尺，上海光学显微镜测微尺和上海亚荣真空抽气泵与干燥器等。　　1.2悦目金蛛的采集　　悦目金蛛采自于江西省贵溪市冷水林场，共28头，其中雄性3头，雌性25头。悦目金蛛主要分布于山区丘陵地带，布圆网于向阳面，以捕食较大型昆虫为主，喜结网于人居区周边灌丛，尤以牛棚猪圈旁为多。悦

5、目金蛛脆弱，附肢较长，极易损伤，在采集过程当中应格外小心；可以用捕虫网将蜘蛛捕获，装入盒内，放入一些树叶，以保持湿度和良好通风性，避免振荡和过度高温。采集完毕返回后，应将蜘蛛及时放在灌木上实行半开放式生态放养。　　2结果与方法　　2.1悦目金蛛毒腺形态与体量相关性分析　　悦目金蛛的毒腺最细端位于螯基前端，并向头部延伸，多位于头胸部前段内，覆盖在神经团上，且左右两两相对趋向于蛛体的纵中轴。为了快速、准确而高效地获得蜘蛛毒腺，避免造成材料的损失，我们对悦目金蛛毒腺进行了形态解剖，明确毒腺的结构和具体位置，然后对毒腺进行形态描述。解剖之前先用电子天平称出蜘蛛的体重,对大型个体用游标卡尺分别量出其头胸

6、部和腹部的长和宽,而对小型蜘蛛个体则用显微测微尺量出其头胸部和腹部的长和宽，随后测量取出的毒腺长和宽，并称重。　　具体测量结果见表1～2，对数据进行回归分析表明：悦目金蛛在性别相同、生境一致、个体大小不同时，蜘蛛毒腺的位置和形态与蜘蛛的种群演化、生活方式和形态体积有一定关系，其中，成蛛的毒腺重量与其体质量之间呈正相关，相关显著；成体的毒腺长度与其头胸长之间也为正相关，显著性检验为极显著。表1悦目金蛛成体毒腺重量与个体质量的相关性（略）表2悦目金蛛成体毒腺长度和个体长度的数据相关性分析（略）　　2.2悦目金蛛粗毒提取和制备方法的优化　　由于悦目金蛛与特大型虎纹捕鸟蛛、敬钊缨毛蛛等相比，成体相对较

7、小，含毒量不多，且附肢长，给采毒带来困难；我们在尝试过活体诱导取毒、电刺激取毒和解剖分离毒腺等多种方法后，确定了采用毒腺解剖法，后经多次比对试验，优化出一条适于毒量不大蜘蛛毒腺的解剖匀浆取毒法，步骤如下：　　先将蜘蛛放入冰箱-4℃冻晕，根据鳌肢确定毒腺管位置，然后从背面“丁字型”剪开其头胸甲，依毒腺管向上延伸方向找到毒腺，并用镊子小心取出，将其冰冻干燥保存。取15对干燥毒腺，在2～3倍去离子水中制