毕业论文--带斑狼蛛粗毒的生理生化分析

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1、带斑狼蛛粗毒的生理生化分析摘要本文描述的带斑狼蛛分布于我国西南地区，常见于稻田及湿地地带。带斑狼蛛毒液是一种化学混合物，对该蜘蛛粗毒进行生物化学和生物学活性方面的分析，探究带斑狼蛛粗毒潜在的药用价值。主要实验步骤为：反相高效液相向色谱（RP-HPLC）分离得到各个组分；基质辅助激光解析电离飞行时间（MALDI-TOF）质谱分析，测定高效液相色谱分离峰的分子量；聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）技术分析粗毒中的小分子量多肽与大分子量蛋白质；粗毒的细胞毒活性分析，带斑狼蛛粗毒对白血病K562细胞、前列腺癌PC-3细胞具有显著的细胞毒活性；抗菌实验结果显示

2、，该粗毒对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、变形杆菌无抑制作用，但对谷氨酸棒状杆菌具有一定的抑制活性。关键词带斑狼蛛粗毒高效液相色谱飞行时间质谱聚丙烯酰氨凝胶电泳细胞毒活性抗菌活性PhysiologicalandBiochemicalstudyofthevenomofspiderLycosavittataThewolfspiderLycosavittatadescribedinthisarticledistributesinSouthwestChina,foundinricefieldsandwetlandareas.ThewolfspiderLycosavit

3、tatavenomisachemicalmixture,toexplorewhethercrudevenomofthewolfspiderLycosavittatahasmedicinalvalue,westudythebiochemistryandbiologicalactivityofthecrudevenom,Mainexperimentalstepsasfollows:highperformanceliquidchromatography(RP-HPLC)separatesallcomponents;matrixassistedlaseranal

4、ysisionizationflighttime(MALDI-TOF)massspectrumanalysisdeterminesthemolecularvolumeoftheseparationpeak;polypropyleneammoniacoagulationrubberelectrophoresis(SDS-PAGE)technologyanalysisthesmallmolecularvolumepeptidesandmacromoleculesproteins;Cytotoxicactivityofthecrudevenom,analysi

5、sthevenomonforleukemiaK562cellsandprostatecancerPC-3cell，antimicrobialactivityagainstforPseudomonasaeruginosa,staphylococcusaureus,ProteusandGlutamineCorynebacterium:resultsareasfollows:ThewolfspiderLycosavittataisrichinpeptidecomponentandhasobviouscellgrowthinhibitionactivityfor

6、leukemiaK562cellsandprostatecancerPC-3cell,ThewolfspiderLycosavittatahasinhibitiononGlutamineCorynebacterium.Keywords:spider;Lycosatuttatasp.nov;crudevenom;HPLC;MALDI-TOF;SDS-PAGE;cellgrowthinhibition；antimicrobialactivity;1绪论1.1研究背景蜘蛛属于节肢动物门，蛛形纲，蜘蛛目，蜘蛛起源早、种类繁多，分布广泛。全世界有近40,000种，

7、我国大约有4,000种，如间斑寇蛛（俗称黑寡妇蜘蛛）、虎纹捕鸟蛛、海南捕鸟蛛、中华狼蛛、雷氏大疣蛛和漏斗网蛛等，在我国剧毒蜘蛛也有10多种[1]。蜘蛛通常以昆虫与哺乳动物为食，以蜘蛛毒液来麻痹和杀死猎物，同时蜘蛛毒液在消化过程中也起到预消化作用。另外，当蜘蛛遇到外来袭击时，也可以起到自卫作用。有些蜘蛛只有在自卫时才射毒，而在制服猎物时不使用毒液。神经毒素快速作用以麻痹猎物，长效神经毒素用来抑制猎物的分解，坏死性毒素及酶类可以让蜘蛛逐步消化猎物。不同种蜘蛛的毒液的成分不同，蜘蛛毒液成分较多，主要的成分有蛋白质、多肽、多胺类神经毒素、酶、核苷酸、游离氨基酸、

8、单胺以及无机盐等物质[2]。科学研究人员在蛇、蝎和芋螺等动物毒液中发现许多有重要