DNA的粗提取和鉴定.ppt

《DNA的粗提取和鉴定.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、专题5DNA和蛋白质技术陇县第二高级中学郑杜娟人教版生物选修一课题1DNA的粗提取与鉴定基础知识染色体成分蛋白质DNA提取DNA的基本思路：利用DNA与蛋白质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。1）不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。2）DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。3）DNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性——蛋白酶水解蛋白质。但是对DNA没有影响。4）DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60～80℃高温，而DNA在80℃以上才会变性。5）DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同

2、：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。DNA的粗提取实验原理案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取1、实验原理实验案例1）不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。2）DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。2.实验材料①动物提醒：人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作为DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。鸡血细胞液的优点：鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的DNA,既经济又易取。②植物：洋葱、新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。63、方法与过程1).制鸡血细胞液0.1g/mL柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL500

3、mL烧杯中，玻棒搅拌，离心或静置沉淀。离心或静置后去掉上清液血浆血细胞提取细胞核物质：溶解核内DNA：析出DNA：DNA黏稠物再溶解：提取较纯净的DNA：DNA的鉴定：滤取DNA黏稠物：过滤含DNA的NaCl溶液：2)实验方法步骤：在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。用两层纱布过滤。滤液中含有DNA。所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起。利用细胞吸水破裂，细胞

4、核内物质释放出来，用纱布过滤取其滤液。在滤液中加2mol/L的NaCl溶液并搅拌，使染色质中DNA与蛋白质分离，DNA充分溶解，过滤(除杂质)在烧杯中用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。DNA与二苯胺试剂反应使溶液呈现蓝色。鉴定不变蓝——对照组溶液逐渐变蓝丝状物(DNA)实验组图示结果加入物质比较均加入：①4mL二苯胺试剂②2mol/LNaCl溶液5mL自变量你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？取少许丝状物，置玻片中央，加1滴甲基绿溶液，丝状物变成绿色。注意：鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。注意事项①制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置

5、后上层是血清，下层为所需要的血细胞。②整个实验中加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释溶液。酒精最好用95%的冷酒精;③加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时,动作要轻缓且朝一个方向。保证DNA分子的完整性。使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。④鉴定DNA时需沸水浴加热。⑤二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果.二苯胺是一种有毒性的试剂,使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位.⑥盛放鸡血细胞的容器最好是塑料容器（鸡血细胞破碎后释放的DNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中DNA的损失）小结：DNA的粗提取与鉴定实验原理DNA在不同

6、浓度NaCl溶液中溶解度不同DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同DNA与二苯胺呈现蓝色反应DNA粗提取选择适宜材料破碎细胞DNA的溶解和析出DNA的纯化鉴定DNA与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应练习1．下列图示中能反映DNA溶解度与NaCI溶液浓度之间关系的是（）2．在DNA的粗提取和鉴定的实验中，提取鸡血细胞的核物质和析出含DNA的粘稠物的操作过程中均用到蒸馏水，其作用在于()A．前者用来溶解血细胞，后者用来溶解DNAB．前者使血细胞吸水破裂，后者用来稀释NaCl溶液C．前者用来分离细胞核与细胞质，后者用来提取DNAD．前者使DNA从核中分离出来

7、，后者使DNA析出CB3、下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正确的是（）A.①是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质B.②是溶解DNA，去除不溶于酒精的杂质C.③是溶解DNA，去除不溶于2mol/LNaCl溶液的杂质D.④是稀释NaCl溶液，去除不溶于低浓度NaCl溶液的杂质①是释放核物质②是提纯DNA，去除溶于酒精的杂质，④稀释NaCl溶液，析出DNA。C