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时间:2020-08-03
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1、DNA的粗提取与鉴定染色体成分蛋白质RNA(少量)DNA提取DNA的基本思路:利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。1DNA的粗提取与鉴定1.原理、方法和目的高温DNA耐高温DNA和蛋白质对高温耐受性不同:蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温,而DNA在80℃以上才会变性。DNA对洗涤剂耐受性洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。加入洗涤剂21)不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。2)DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同,DNA不溶于酒精,
2、细胞中某些蛋白质则溶于酒精。3)DNA和蛋白质对酶耐受性不同:酶的专一性——蛋白酶水解蛋白质。但是对DNA没有影响。4)DNA和蛋白质对高温耐受性不同:蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温,而DNA在80℃以上才会变性。5)DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同:洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。提取DNA的原理包括DNA的两个方面溶解性和耐受性1.DNA的粗提取实验原理42.实验材料①动物鸡血细胞液的优点提醒:人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核,也没有DNA,不适于作为DNA提取的材料,但
3、却是提取血红蛋白的理想材料。鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核,含大量的DNA,既经济又易取②植物:新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。53、方法与过程1).制鸡血细胞液0.1g/mL柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL500mL烧杯中,玻棒搅拌,离心或静置沉淀。离心或静置后去掉上清液血浆血细胞6提取细胞核物质:溶解核内DNA:在滤液中加2mol/L的NaCl溶液并搅拌,使染色质中DNA与蛋白质分离,DNA充分溶解,过滤(除杂质)得到DNA滤液析出DNA:DNA黏稠物再溶解:在烧杯中用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。提取较纯净的DNA
4、:DNA的鉴定:取两试管各加2mol/L的NaCl溶液,将DNA充分溶解于其中一试管,然后向两试管加入二苯胺试剂,混匀沸水中加热5min后冷却,可发现DNA与试剂反应使溶液呈现蓝色。滤取DNA黏稠物:过滤含DNA的NaCl溶液:用两层纱布过滤。2)实验方法步骤:在上述溶液中缓缓加入蒸馏水,并沿一个方向轻轻搅拌,出现丝状物;当丝状物不在增加时,停止加水(此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L)。用多层纱布过滤,含DNA的粘稠物留在纱布上。滤液DNA所得的滤液+体积分数为95%的冷却酒精50mL,用玻棒沿一个方向轻缓搅拌
5、,溶液中(析出)出现乳白色丝状物,用玻棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分。利用细胞吸水破裂,细胞核内物质释放出来,后用纱布过滤取其滤液。血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂,据此可得出含核DNA的溶液。7关于DNA粗提取的实验材料的选择,也经过了多次实验结果的比较,最终选择鸡血做实验材料的原因是什么?请回答下列问题:(1)鸡血中红细胞,家鸡属于鸟类,新陈代谢旺盛,因而血液中细胞数目较多,可以提供丰富的(2)实验前由老师制备鸡血细胞液供同学们做实验材料,而不用鸡全血,主要原因是(3)生活在牧区的人们,采集羊、牛和
6、马血比较方便,若他们按实验要求完成实验步骤后,结果是,这是因为,但若改用动物肝脏做实验材料,实验可以顺利进行,这是因为。(4)若选用动物肝脏做实验材料,在提取之前,最好增加程序,使组织细胞更易分离。含有完整的、成形的细胞核红DNA量,所以一般采用鸡血鸡的全血包括血浆和血细胞,血浆中无DNA,全血中除掉血浆后就是浓缩的血细胞液,DNA的相对含量提高了。在实验中很难提取到DNA哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核,反靠白细胞和淋巴细胞中的少量DNA,在实验中很难提取到肝细胞中含有细胞核,并且肝组织容易被破坏,有利于DNA的提取若使肝组
7、织易分离,将肝细胞剪碎、研磨是一种简便易行的方法。88、DNA的鉴定①DNA与二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂②紫外灯照射法A、配制染色剂,用蒸馏水配制万分之五的溴化已锭(EB)B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上,再滴一滴EB溶液染色C、将蜡纸放在紫外灯(260nm)下照射(暗室中),可见橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260nm处)③甲基绿(蓝绿色)鉴定不变蓝——对照组溶液逐渐变蓝丝状物(DNA)实验组图示结果加入物质比较均加入:①4mL二苯胺试剂②2mol/LNaCl溶液5mL鉴
8、定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。自变量你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗?洋葱的鳞片叶表皮细胞取少许丝状物,置玻片中央,加1滴甲基绿溶液,丝状物变成绿色。鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。1011注意事项①制备鸡血细胞液时,要在取鸡血的同时加
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