DNA的粗提取和鉴定分析课件.ppt

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1、DNA的粗提取与鉴定染色体成分蛋白质RNA(少量)DNA提取DNA的基本思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。1DNA的粗提取与鉴定1．原理、方法和目的高温DNA耐高温DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。DNA对洗涤剂耐受性洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。加入洗涤剂21）不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。2）DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，

2、细胞中某些蛋白质则溶于酒精。3）DNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性——蛋白酶水解蛋白质。但是对DNA没有影响。4）DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。5）DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。提取DNA的原理包括DNA的两个方面溶解性和耐受性1.DNA的粗提取实验原理42.实验材料①动物鸡血细胞液的优点提醒：人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作为DNA提取的材料，但

3、却是提取血红蛋白的理想材料。鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的DNA,既经济又易取②植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。53、方法与过程1).制鸡血细胞液0.1g/mL柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心或静置沉淀。离心或静置后去掉上清液血浆血细胞6提取细胞核物质：溶解核内DNA：在滤液中加2mol/L的NaCl溶液并搅拌，使染色质中DNA与蛋白质分离，DNA充分溶解，过滤(除杂质)得到DNA滤液析出DNA：DNA黏稠物再溶解：在烧杯中用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。提取较纯净的DNA

4、：DNA的鉴定：取两试管各加2mol/L的NaCl溶液，将DNA充分溶解于其中一试管，然后向两试管加入二苯胺试剂，混匀沸水中加热5min后冷却，可发现DNA与试剂反应使溶液呈现蓝色。滤取DNA黏稠物：过滤含DNA的NaCl溶液：用两层纱布过滤。2)实验方法步骤：在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。滤液DNA所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌

5、，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，后用纱布过滤取其滤液。血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得出含核DNA的溶液。7关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较，最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题：（1）鸡血中红细胞，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中细胞数目较多，可以提供丰富的（2）实验前由老师制备鸡血细胞液供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因是（3）生活在牧区的人们，采集羊、牛和

6、马血比较方便，若他们按实验要求完成实验步骤后，结果是，这是因为，但若改用动物肝脏做实验材料，实验可以顺利进行，这是因为。（4）若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加程序，使组织细胞更易分离。含有完整的、成形的细胞核红DNA量，所以一般采用鸡血鸡的全血包括血浆和血细胞，血浆中无DNA，全血中除掉血浆后就是浓缩的血细胞液，DNA的相对含量提高了。在实验中很难提取到DNA哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，反靠白细胞和淋巴细胞中的少量DNA，在实验中很难提取到肝细胞中含有细胞核，并且肝组织容易被破坏，有利于DNA的提取若使肝组

7、织易分离，将肝细胞剪碎、研磨是一种简便易行的方法。88、DNA的鉴定①DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂②紫外灯照射法A、配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的溴化已锭（EB）B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴一滴EB溶液染色C、将蜡纸放在紫外灯(260nm)下照射（暗室中），可见橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260nm处)③甲基绿（蓝绿色）鉴定不变蓝——对照组溶液逐渐变蓝丝状物(DNA)实验组图示结果加入物质比较均加入：①4mL二苯胺试剂②2mol/LNaCl溶液5mL鉴

8、定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。自变量你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？洋葱的鳞片叶表皮细胞取少许丝状物，置玻片中央，加1滴甲基绿溶液，丝状物变成绿色。鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。1011注意事项①制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加