血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡与乙酰胆碱含量变化

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1、血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡与乙酰胆碱含量变化作者：张丽香蔺心敬李吕力肖继东王铁建罗永坚【摘要】目的探讨血管性痴呆（VD）大鼠海马神经元凋亡和乙酰胆碱(ACh)含量变化在VD发病过程中的作用。方法将90只大鼠随机分为模型组、假手术组和正常组,每组30只。再将各组的30只大鼠根据造模后断头取脑时间随机分为3小组，即7、14、21d组,每组10只大鼠。采用反复大鼠双侧颈动脉缺血再灌注,加剪尾放血法制备VD大鼠模型;用TUNEL法检测海马组织的凋亡细胞，用生化法检测ACh含量。结果模型组大鼠海马组织在第7、14、21天均有大量凋亡神经元，且ACh含量持续降低，与假手术组及正常组相比差异

2、显著（P＜0.01）。结论脑海马组织神经元的大量凋亡和ACh含量持续降低可能在VD发病过程中起重要作用。【关键词】血管性痴呆；海马；神经元凋亡；乙酰胆碱【Abstract】ObjectiveToinvestigatethechangeofneuronapoptosisandacetylcholineinhippocampusofratentia(VD）.Methods90adultodel,shamoperation,controlgroups.EachgrouplydividedintothreesubgroupsaccordingtodifferenttimeafterbE

3、ingkilled,including7,14and21dafterVDmodel.TheimitativeVDmodeloncarotidarteryandbloodlettingfromrat′stail.Thecellapoptosismunohistochemistryinhippocampal.ResultsTheapoptoticneuronofthehippocampalinthemodelgroupmarkedlyincreasedandtheacetylcholinedecreasedthanthoseoftheshamoperationandthecontr

4、olgroupat7,14,21days(P＜0.01).ConclusionsTheincreaseoftheneuronapoptosisandthedecreaseoftheacetylcholineinhippocampaltissuesmaybethepathologicalreasonoftheVD.【Keyentia；Hippocampus；Apoptosis；Acetylcholine　　近年研究表明〔1〕，在大于65岁的脑卒中患者中，约25%～41％的患者在三个月内发展为血管性痴呆（VD）。防治VD已成为目前急需解决的医疗和社会问题，但是目前对VD的发病机制尚不

5、清楚。脑海马组织是与人类学习、记忆关系最为密切的功能区,具有对缺血的选择易损伤性〔2〕，其神经元凋亡可能在VD的发病过程中具有重要作用〔3〕。脑内乙酰胆碱（ACh）则是迄今发现的与人类学习、记忆关系最为密切的神经递质。有关神经元凋亡和ACh在VD大鼠脑组织中的动态变化及作用尚未见报道。本实验旨在通过对VD大鼠海马组织神经元凋亡和ACh含量的动态观察，探讨其在VD发病过程中的作用，以期为临床更好地预防VD的发生、发展提供理论基础。　　1材料与方法　　1.1试剂和仪器　　凋亡TUNEL试剂盒购自美国ROSS公司，SABC、DAB染色试剂盒、苏木素均购自武汉博士德生物工程有限公司。AC

6、h由石家庄药业集团股份有限公司生产，UV3000紫外分光光度计由日本岛津公司生产，TD2000计算机图像分析系统由北京天地公司生产。　　1.2动物来源和分组　　in后松开丝扣使血液灌注10min，共重复3次，同时在距尾尖1cm处剪断放血约1ml后热凝止血。第3次再灌注后观察30min后缝合皮肤，切口局部注射庆大霉素0.2万U,术后肌注青霉素0.2万U/d，连续3d。假手术组大鼠仅分离双侧颈总动脉，对照组大鼠不做任何处理。　　1.4海马组织神经元凋亡检测　　1.4.1组织标本处理　　实验终点将大鼠给予4%多聚甲醛灌注30min。断头取脑放入4%多聚甲醛固定后，依次酒精脱水，二甲

7、苯透明，浸蜡，包埋。连续冠状切片，片厚5μm。　　1.4.2TUNEL法检测细胞凋亡按试剂盒说明进行。　　1.4.3结果观察　　结果在40倍物镜下观察每张切片TUNEL阳性细胞，用TD2000计算机图像分析系统处理，采集图像输入计算机，以灰度计算所选视野阳性染色的单位面积（阳性细胞的面积占所选整个视野面积的百分比），每张切片取梗死灶边缘区互不重叠的5个视野，其均值即为该标本每个高倍镜视野中阳性细胞的单位面积。　　1.5海马组织ACh含量的检测　　1.5.1样本处理　　实验终点将