复合bfgf缓释微球的制备与性能测定论文

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1、复合bFGF缓释微球的制备与性能测定论文刘锐,黄沙,金岩,吴红,姜玲,刘涛【关键词】,碱性成纤维细胞生长因子PreparationandcharacteristictestofbFGFimpregnatedmicrosphere【Abstract】AIM:Topreparethebasicfibroblastgropregnatedmicrosphereandtostudyitscharacteristics.METHODS:ThebFGFimpregnatedmicrosphereprovedemulsifiedcoldcondensatio

2、nmethod.Thephysicalproperties,drugcontentandencapsulationeasuredbyELISA.RESULTS:Theaveragediameterofmicrosphere,theaveragedrugcontentthesecondtothefifthdayand93.94%bytheseventhday.CONCLUSION:Thepreparationmethodissimple,rapidandaccurateandthereleaseofbFGFfromthemicrospheresc

3、anbesustainedforalongertime.【Keyicrosphere;sustainedrelease;encapsulation【摘要】目的:制备复合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的可降解缓释微球,考察其各项性能,为进一步应用于组织工程奠定基础.方法:采用改良的乳化冷凝法交联制备复合bFGF的缓释微球.freel;平均载药率为0.24%,平均包裹率为96.82%.d1体外释放28.23%,2~5d时累积释放率达到57.19%,d7时释放减慢且累计浓度为93.94%.结论:复合bFGF的缓释微球制备工艺简便,性能优良;可在较

4、长时间内持续释放活性bFGF,与组织工程支架的结合应用具有可行性.【关键词】碱性成纤维细胞生长因子;微球;缓释;包裹率0引言生长因子的应用一直是组织工程领域的重要课题之一.它具有多种生物学活性,可提供有利于细胞生长的微环境,促进新生组织血管生成等[1].但由于生长因子半衰期短,溶液进入体内后迅速扩散、变性或酶解,难以保持其生物活性[2].我们制备复合碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrog/L,等电点9.6,Sigma公司),人bFGF定量EIA试剂盒(QuantiKineR,RDsystems),250g/L戊二醛,丙酮

5、,异丙醇,无水乙醚,液体石蜡,氨基乙酸为国产分析纯,Span80(Sigma公司)为进E1分析纯,水为双蒸水,JJ1型精确电子搅拌器仪,TGL16G高速离心机,GENESIS冻干机(Virtis公司),BX41数码显微镜(Olympus).1.2方法1.2.1复合生长因子微球的制备将含有10g/LSpan80的液体石蜡30mL置于三口瓶中预热至55℃,快速搅拌下滴加入同样温度的明胶水溶液4mL,并调节搅拌速度至450r/min,继续搅拌10min;形成油包水乳剂后迅速改冰浴,继续搅拌10min,使其完成固化;加入250g/L戊二醛0.1mL,搅

6、拌下预固化2h,4℃固化24h,用适量丙酮、异丙醇、乙醚洗涤,挥去乙醚,真空干燥,得淡黄色粉末状微球,将200μL的bFGF溶液滴加在20mg的冻干明胶微球上,在室温下保持30min以使bFGF完全融入微球.钴60照射灭菌封存.以丙酮为分散剂将空白微球样本及含有bFGF的微球样本置于光镜下,观察其外形及分散度.同时测量500个微球的直径计算其平均粒径.以算术平均径为微球的平均粒径,计算公式为:平均粒径=n1d1+n2d2+…+nndn/n1+n2+n3+…+nn式中n1,n2…nn为粒子数,d1,d2…dn为粒径.1.2.2微球含量及缓释性能测

7、定根据人bFGF定量EIA试剂盒说明书配置标准液,在492nm处测各孔A值.以标准品0,8,16,31,62,125,250和500ng/L之A值作出标准曲线并拟合线形回归方程.取微球样品20mg,放入PBS缓冲液中,加热至完全溶解,冷却后再用缓冲液稀释定容.测出A492nm值,然后在标准曲线上查处相应bFGF含量,并由此计算出微球的载药率以及标准率.载药率=(bFGF质量/缓释微球质量)×100%.包裹率=(bFGF质量/缓释微球中bFGF理论质量)×100%.取缓释微球(2mg),用PBS缓冲液100mL作为溶出介质.药物体外溶出仪的温度保

8、持在(37.0±0.5)℃.磁力搅拌转速100r/min.分别于各时间点(1,2,3,4,5,6,7d)取样100μL.每次取样后,立即补充同温度的P

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