复合bfgf缓释微球的制备与性能测定

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1、复合bFGF缓释微球的制备与性能测定作者：刘锐，黄沙，金岩，吴红，姜玲，刘涛　【关键词】,碱性成纤维细胞生长因子PreparationandcharacteristictestofbFGFimpregnatedmicrosphere　　【Abstract】AIM:Topreparethebasicfibroblastgropregnatedmicrosphereandtostudyitscharacteristics.METHODS:ThebFGFimpregnatedmicrosphereprovedemulsifiedcoldcon

2、densationmethod.Thephysicalproperties,drugcontentandencapsulationeasuredbyELISA.RESULTS:Theaveragediameterofmicrosphere,theaveragedrugcontentthesecondtothefifthdayand93.94%bytheseventhday.CONCLUSION:Thepreparationmethodissimple,rapidandaccurateandthereleaseofbFGFfromthem

3、icrospherescanbesustainedforalongertime.　　【Keyicrosphere;sustainedrelease;encapsulation　　【摘要】目的：制备复合碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的可降解缓释微球，考察其各项性能，为进一步应用于组织工程奠定基础.方法：采用改良的乳化冷凝法交联制备复合bFGF的缓释微球，测定微球形态、粒径、载药率和包裹率等，并采用ELISA法考察其体外bFGF的缓释效能.结果：缓释微球平均粒径(12.4±3.6)μm；平均载药率为0.24%，平均包裹率为96.82%.

4、d1体外释放28.23%，2~5d时累积释放率达到57.19%,d7时释放减慢且累计浓度为93.94%.结论：复合bFGF的缓释微球制备工艺简便，性能优良；可在较长时间内持续释放活性bFGF，与组织工程支架的结合应用具有可行性.　　【关键词】碱性成纤维细胞生长因子；微球；缓释；包裹率　　0引言　　生长因子的应用一直是组织工程领域的重要课题之一.它具有多种生物学活性，可提供有利于细胞生长的微环境，促进新生组织血管生成等［1］.但由于生长因子半衰期短，溶液进入体内后迅速扩散、变性或酶解，难以保持其生物活性［2］.我们制备复合碱性成纤维细胞生

5、长因子(basicfibroblastgrog/L，等电点9.6，Sigma公司)，人bFGF定量EiA试剂盒（QuantiKineR,RDsystems），250g/L戊二醛，丙酮，异丙醇，无水乙醚，液体石蜡，氨基乙酸为国产分析纯，Span80(Sigma公司)为进E1分析纯，水为双蒸水，JJ1型精确电子搅拌器仪，TGL16G高速离心机，GENESIS冻干机(Virtis公司)，BX41数码显微镜（Olympus).　　1.2方法　　1.2.1复合生长因子微球的制备将含有10g/LSpan80的液体石蜡30mL置于三口瓶中预热至55℃

6、，快速搅拌下滴加入同样温度的明胶水溶液4mL，并调节搅拌速度至450r/min，继续搅拌10min；形成油包水乳剂后迅速改冰浴，继续搅拌10min，使其完成固化；加入250g/L戊二醛0.1mL，搅拌下预固化2h，4℃固化24h，用适量丙酮、异丙醇、乙醚洗涤，挥去乙醚，真空干燥，得淡黄色粉末状微球，将200μL的bFGF溶液滴加在20mg的冻干明胶微球上，在室温下保持30min以使bFGF完全融入微球.钴60照射灭菌封存.以丙酮为分散剂将空白微球样本及含有bFGF的微球样本置于光镜下，观察其外形及分散度.同时测量500个微球的直径计算其

7、平均粒径.以算术平均径为微球的平均粒径，计算公式为：平均粒径=n1d1+n2d2+…+nndn/n1+n2+n3+…+nn式中n1,n2…nn为粒子数，d1,d2…dn为粒径.　　1.2.2微球含量及缓释性能测定根据人bFGF定量EIA试剂盒说明书配置标准液，在492nm处测各孔A值.以标准品0，8，16，31，62，125，250和500ng/L之A值作出标准曲线并拟合线形回归方程.取微球样品20mg,放入PBS缓冲液中，加热至完全溶解，冷却后再用缓冲液稀释定容.测出A492nm值，然后在标准曲线上查处相应bFGF含量，并由此计算出微

8、球的载药率以及标准率.载药率=（bFGF质量/缓释微球质量）×100%.包裹率=（bFGF质量/缓释微球中bFGF理论质量）×100%.取缓释微球(2mg)，用PBS缓冲液100mL作为溶出介质.药物体外溶