土霉素片微生物检查方法的验证

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1、土霉素片微生物检查方法的验证【论文关键词】土霉素片；微生物限度检查法【论文摘要】目的：建立土霉素片的微生物限度检查方法。方法：采用薄膜过滤法对土霉素片处理后，分别进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。结果：金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的回收率均大于70%。结论：土霉素片采用薄膜过滤法检查微生物限度方法成立。Terramycinpiecemicroorganisminspectionmethodconfirmationethod:Usesthethinfilmtofilterthelaycinpieceprocessing,separatelycarriesonthebacterium,them

2、oldandthesaccharomycetescountsthemethodconfirmation.Result：Thegoldenyelloycinpieceusesthethinfilmtofilterthelaicroorganismlimitmethodtobetenable.　　【Keyycinpiece;Microorganismlimitinspectionmethod　　　　土霉素是四环素类抗生素，能特异性地与细菌核糖体30S亚基的A位结合，抑制肽链的增长和影响细菌蛋白质的合成，对细菌有广谱抑菌作用。因此其微生物限度检查不能用平皿法，而应采用薄膜过滤法消除其抑菌作用后再

3、检查。　　　　1材料　　1.1仪器：HUG培养基，甘露醇氯化钠琼脂培养基等，均由中国药品生物制品检定所提供。　　1.3菌种：阳性对照菌：金黄色葡萄球菌（验证细菌）、白色念珠菌（验证酵母菌、霉菌）；阴性对照：金黄色葡萄球菌（验证大肠埃希菌）。所用菌种均由中国药品生物制品检定所提供；稀释剂及冲洗剂为pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。　　1.4样品：土霉素片［0.25g（25万单位）］，厂家为河南华利药业有限责任公司，批号为07070601。　　　　2方法与结果　　2.1细菌、霉菌、酵母菌检查方法验证。　　2.1.1细菌检测方法验证。　　2.1.1.1试验组：取供试品10g，加入pH7.0氯化钠-蛋

4、白胨缓冲液，于康氏振荡器上振摇10分钟，使片分散，500转、分离心后，分离上清液作为供试液。取上述供试液10ml，加入100ml稀释剂中，薄膜过滤，用冲洗液冲洗2次，每次100ml，第3次冲洗液中加入金黄色葡萄球菌菌悬液0.5ml，薄膜过滤，取出滤膜，面朝上贴于营养琼脂平皿上，35℃培养48小时，计数。　　2.1.1.2菌液组：取金黄色葡萄球菌菌悬液0.5ml,直接接种于营养琼脂平皿上，35℃培养48小时，计数。　　2.1.1.3供试品对照组：取上述供试液10ml,加入100ml稀释剂中，薄膜过滤，用冲洗液冲洗3次，每次100ml，取出滤膜，面朝上贴于营养琼脂平皿上，35℃培养48小时，计数

5、。　　2.1.1.4稀释剂对照组：取稀释液10ml,薄膜过滤，用冲洗液冲洗2次，每次100ml,第3次冲洗液中加入0.5ml金黄色葡萄球菌菌悬液，薄膜过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂平皿上，35℃培养48小时，计数。　　2.1.1.5上述试验连续做三次，结果如下：　　金黄色葡萄球菌计数后平均值：　　稀释剂对照组菌数：第一次47个，第二次53个，第三次49个；　　菌液组菌数：第一次58个，第二次64个，第三次60个；　　试验组菌数：第一次45个，第二次54个，第三次46个；　　供试品对照组菌数：第一次0个，第二次0个，第三次0个。　　2.1.1.6计算金黄色葡萄球菌回收率。　　2

6、.1.1.6.1稀释剂对照组的回收率:(稀释剂对照组的平均菌落数/菌液组的平均菌落数)×100%　　第一次：47/58×100%=81.0%　　第二次:53/64×100%=82.8%　　第三次:49/60×100%=81.7%　　2.1.1.6.2试验组的回收率:　　[(试验组的平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数]×100%　　第一次：（45-0）/58×100%=77.6%　　第二次:（54-0）/64×100%=84.4%　　第三次:（46-0）/60×100%=76.7%　　2.1.2霉菌、酵母菌检查方法验证。　　2.1.2.1试验组：取供试品10g，

7、加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，于康氏振荡器上振摇10分钟，使片分散，500转、分离心后，分离上清液作为供试液。取上述供试液10ml，加入100ml稀释剂中，薄膜过滤，用冲洗液冲洗2次，每次100ml，第3次冲洗液中加入白色念珠菌菌悬液0.5ml，薄膜过滤，取出滤膜，面朝上贴于营养琼脂平皿上，23℃培养72小时，计数。　　2.1.2.2菌液组：取白色念珠菌菌悬液0.5ml,直接接种于营养琼脂平皿上，23℃