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1、紫丹活血片微生物检查方法学验证摘耍：冃的：建立紫丹活血片微生物限度检査标准方法。方法：按《中国药典》2005版的有关要求•通过接种代表性的阳性菌株，采用常规法、薄膜过滤法、稀禅法进行方法学验证。结果：常规法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑Illi霉菌的冋收率均高于70%,对枯草杆菌、白色念珠菌的回收率均低于70%。釆用薄膜过滤法每筒冲洗400ml（分4次），可以消除样甜対枯草杆菌、白色念珠菌的抗菌活性，使其正常牛•长；控制菌检查采用稀释法进行检查。结论：本样品可以采用薄膜过滤法及稀释法进行测定。关键词：紫丹活血片；微生物限度检查；常规法；薄膜过
2、滤法；稀释法；冲洗量；方法学验证中图分类号：R927.1文献标识码：A文章编号:1007-2349（2007）12-0034-02紫丹活血片具冇活血化瘀，理气止痛z功能.临床用于气滞血瘀所致胸痹（冠心病心绞痛）、眩晕（脑动脉硬化）。当建立药品的微生物限度检杳法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定及控制菌检查。按《中国药典》2005版的有关耍求，通过接种代表性的阳性菌株，发现紫丹活血片具有抑菌活性，采用薄膜过滤法，可以消除紫丹活血片抑菌活性，确定了薄膜过滤法的最佳冲洗量和实验条件，建立了微生物限度检查
3、方法。1仪器与材料1.1仪器HTY-III型智能集菌仪，（杭州泰林医疗器械厂生产；开放式一次性薄膜过滤器,北京牛牛基因技术有限公司，批号：20051005）o1.2样品紫丹活血片（云南天利药业有限公司生产，规格0.4g/粒，批号20060301）o1.3培养基胆盐乳糖增培养棊（批号，05222）,玫魂红钠琼脂培养基（批号，030710）,营养琼脂培养基（批号，050328）,改良马丁琼脂培养基（批号，010315）,营养肉汤培养基（批号,041010）,PH7.0氯化钠一蛋白月东缓冲液（批号,050217）1.4菌种大肠埃希菌（Escheri
4、chiacoli）[CMCC（F）44102]、枯草芽鞄杆菌（Bacillussubti1is）[CMCC（B）63501]、金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）[CMCC（B）26003]>白色念珠菌（Candidaalbicans）[CMCC（F）98001]、黑曲^（Aspergillusniger）[CMCC（F）98003]（>P国药品生物制品检定所提供）o2方法验证微牛•物限度检查的验证实验按中国药典2005版微生物限度检查法（附录XIJ）常规法和薄膜过滤法进行。2.1菌液制备取上述经34°C培养18〜24h
5、的人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽也杆菌肉汤液体培养物lml,加入9ml0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5〜10-7备用；取经24°C培养18〜24h的白色念珠菌霉菌液体培养物lml.加入9ml0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至105备丿山取经培养一周的黑曲霉菌斜面物,加0.9%氯化钠溶液3ml,洗下砲子，转移至另一空管，标准比浊后，取51加入0.9%氯化钠溶液中10倍稀释至10-4备用。2.2菌液的检验取上述金黄色匍萄球菌、枯草杆菌、人肠埃希菌
6、10〈sup>-5〈/sup>~10-7稀释液各lml,用45°C营养琼脂培养基20ml注皿，各平行测定两皿，30〜35°C培养48h,计数，应约为50〜100cfu/ml；取上述白色念珠菌10-5〜10-6稀释液及上述黑曲霉菌10-4抱了悬液各lml,用45°C琥红琼脂培养基20ml注1111,各平行测定两1111,23〜28°C培养，逐H观察计数，应约为50〜lOOcfu/mlo结果见表102.3供试液制备取样品10g,加pH7.0无菌氯化钠一蛋白腺缓
7、冲液100ml,混匀，取适量3000转/分离心10min作为1:10的供试液。2.4回收率的测定2.4.1细菌数霉菌数常规法测定试验组:取1:10供试液1ml、50〜lOOcfu试验菌同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24〜72h逐LI观察结果。菌液组：测定每一菌株所加的试验菌数（同菌液检验）。供试品对照纽：取1:10供试液1ml加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24〜72h逐日观察结果，测定供试品本底菌数。2.4.2细菌数薄膜过滤法测定取1:10的供试液1ml,注入开放式滤器（先用少最缓冲液润
8、湿滤器），用PH7.0无菌氯化钠一蛋白陈缓冲液冲洗滤膜，毎次100讯共4次（总冲洗400ml）.加lml（50〜lOOcfu）试验菌，抽干后，取出滤膜菌面朝上贴入规
