实验性重症急性胰腺炎对sd大鼠小肠防御素

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1、实验性重症急性胰腺炎对SD大鼠小肠防御素作者：李钢，胡祖健，王凯诚，罗静，赵金锋，刘世宾，严萍，陈海平【摘要】目的检测实验性重症急性胰腺炎时，SD大鼠小肠防御素-5mRNA表达的变化，从分子水平上探讨胰腺炎时肠黏膜屏障受损的机制。方法40只SD大鼠随机分成4组，每组10只。模型组（B～E组）改良Aho’s法造模，于造模后第12，24和36小时处死，正常对照组（A组）直接处死。取血送淀粉酶检查，胰腺送病理检查。用QuantyOne软件分析PCR产物凝胶图像以检测各组防御素-5mRNA的表达变化。结果改良Aho’s法导致了SD大鼠重症急性胰腺炎，12h防御素-5mRNA

2、表达轻微下调，36h下调最明显。结论防御素-5的获得性缺陷可能是胰腺炎时发生肠道细菌移位的重要原因之一。【关键词】胰腺炎；防御素-5；mRNA表达AbstactObjeciveTodetectthechangesofintestinaldefensin-5mRNAexpressioninSDratsentalsevereacutepancreatitisandexplorethemechanismsofbacterialtranslocationatthemolecularlevel.MethodsFortySDratslydividedinto4groupsent

3、algroups(fromBtoD)，pancreatitisinducedbymodifiedAho’smethod，ylaseandpancreaticpathologicalalterationsplificationproductsofRT-PCRagesodifiedAho’smethod.Intestinaldefensin-5mRNAexpressionostmarkedlyat36thhours.ConclusionAcquireddefensin-5deficiencymayplayanimportantroleinthepathogenesiso

4、fbacterialtranslocationinsevereacutepancreatitis.KeyRNAexpression重症急性胰腺炎（severeacutepancreatitis，SAP）的发病过程分为急性全身炎性反应期、坏死感染期、感染愈合期。已有的研究资料提示SAP的坏死性感染与肠道的细菌移位相关，而肠源性感染的发生与肠黏膜免疫屏障（天然免疫和获得性免疫）受损相关。近年来发现的肠道天然免疫物质防御素-5（defensin5，Dn-5）在肠黏膜抗微生物防御中的作用颇受关注，具有抗菌谱广、不易产生耐药、不影响肠道微生态平衡等优点[1]。本实验通过研究S

5、AP发病过程中小肠Dn-5的表达变化，为SAP肠道细菌移位进一步寻找理论依据，同时为寻找能诱导Dn-5表达的新药打下基础。1材料和方法1．1实验动物分组和试剂SD大鼠40只，雌雄各半，体质量为(250±10)g，由浙江省医学科学院动物实验中心提供，随机分为A组（正常对照组）、B组（模型12h组）、C组（模型24h组）、D组（模型36h组）四组。牛磺胆酸钠（taurocholicacid）购自Sigma公司。RNA提取试剂盒（TrizolReagent）购自GibcoBRL公司，RT-PCR试剂盒购自TaKaRaBiotechnology公司。Dn-5引物由上海生物工

6、程公司合成并提供，上游引物：5’-TCGCAGCCATGAAGAAACTT-3’；下游引物：5’-ATCGGTGGCCTCAGAACTC-3’。内参为三磷酸甘油醛脱氢酶，上游引物：5‘-AGACAGCCGCATCTTCTTGT-3’；下游引物5’-CTTGCCGTGGGTAGAGTCAT-3’。1．2方法1．2．1模型各组术前禁食12h，自由饮水。2.5%戊巴比妥钠0.2ml/100g腹腔注射麻醉。备皮、消毒、铺巾，经上腹正中切口依次进腹。进腹后，用棉球显露肝下间隙，确认胆胰管及肝门部肝总管，暴露胰腺头部，用左手食指垫起中段十二指肠，辨认肠管壁内潜行十二指肠乳头，用

7、微创镊子由十二指肠肠系膜对侧缘无血管区戳小孔，硬膜外麻醉导管(斜行截去头部侧孔)从小孔进入肠管，沿乳头方向探入胆胰管，与胆胰管呈平行方向顺行推入1cm，用显微血管镊夹管固定，用动脉夹夹闭肝总管，硬膜外导管末端连接微泵(浙江大学医疗仪器公司)，逆行注入5%牛磺胆酸钠0.1ml/100g，速度为0.2ml/min，注射毕，停留4min，移去硬膜外导管和动脉夹，用无损伤缝线缝闭十二指肠小孔，逐层关腹。1．2．2取材心脏采血，检测淀粉酶，观察腹腔脏器的变化，完整切除胰腺，用10%的甲醛溶液固定胰腺标本，送病理检查，取回肠末端100～120mg组织，切开，4℃盐水漂洗3遍