脆性x综合征的产前基因筛查与诊断论文

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1、脆性X综合征的产前基因筛查与诊断论文杨丹彤贾颐舫吴爱华张爱东【摘要】目的对脆性X综合征进行产前基因筛查与诊断。方法采用聚合酶链式反应(PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对32例孕妇及其胎儿的脆性X基因(CGG)n重复序列进行检测，同时采用PCR扩增牙幼基因对胎儿性别进行鉴定。结果在32例孕妇及其胎儿中，检出1例孕妇为前突变携带者，1例男性胎儿为脆性X综合征患者。结论采用PCR扩增脆性X基因(CGG)n重复序列，结合扩增牙幼基因进行性别鉴定，可对脆性X综合征进行产前筛查与诊断。【关键词】脆性X综合征;聚合酶链反应;牙幼基因;

2、产前诊断PrenatalscreeninganddiagnosisforfragileXsyndromeYANGDantong,JIAYifang,ethodsTheCGGrepeatregionintheFMR1geneplifiedbyPCRandenandtheirfetusesandthefetalsexplificationofamelogeningene.ResultsOnepremutationcarrierandonemalefetuse32pregnantenandtheirfetuses.Conclu

3、sionAmplificationoftheCGGrepeatregionintheFMR1geneandtheamelogeningenebyPCRcanbeappliedforprenatalscreeninganddiagnosisforfragileXsyndrome.【Keye;Amelogeningene;Prenatalscreening;Prenataldiagnosis脆性X综合征(fragileXsyndrome，FXS)是一种X连锁遗传病.freelerasechainreaction,PCR)扩增

4、FMR1基因的(CGG)n重复序列作为FXS的筛查与诊断方法，结合PCR扩增牙幼基因(amelogenin)作为性别的诊断方法，用于FXS的产前筛查与诊断，报告如下。对象与方法一、对象2007年1月～2007年10月来本所优生遗传门诊进行羊水染色体检查的无FXS家族史孕妇30例，另有2例孕妇系FXS家系成员，其中1例已生有1个FXS男性患儿。32例孕妇均为单胎妊娠。孕妇于孕18～22周抽取羊水，留用5ml，3000r/min离心10min后弃上清，细胞沉淀-20℃保存备用。同时取孕妇外周血5ml，0.1mol/LEDTA

5、抗凝，-20℃保存备用。二、方法1.基因组DNA提取：采用基因组DNA提取试剂盒(Takara公司)，按说明提取。2.PCR扩增FMR1基因(CGG)n重复序列：参照文献2，在FMR1基因5’非翻译区(CGG)n重复序列两侧设计合成一对引物(由上海生工生物技术有限公司合成)，序列如下。FMRF5’GCTCAGCTCCGTTTCGGTTTCACTTCCGGT3’FMRR5’AGCCCCGCACTTCCACCACCAGCTCCTCCA3’PCR反应总体积为25μl，含1×PCRbuffer，2UGoldenTaqD

6、NA聚合酶(ABI公司)，12.5%二甲亚砜(DMSO)，12.5pmol/L引物，10mmol/LdNTP，50ng/L基因组DNA。反应条件为：98℃预变性10min，97℃变性60s，61℃退火60s,72℃延伸120s，共35个循环，最后72℃延伸5min。3.PCR扩增牙幼基因：选择XY同源牙幼基因(amelogenin)第一个内含子附近的特异序列进行扩增，引物序列如下。AmelF5’CCCTGGGCTCTGTAAAGAATAGTG3’AmelR5’ATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTG3

7、’反应体系为25μl，含1×PCRbuffer，1.5UTaq酶，12.5pmol/L引物，10mmol/LdNTP，50ng/L基因组DNA。扩增条件：95℃预变性3min，94℃变性60s，60℃退火30s，72℃延伸60s，共35个循环，最后72℃延伸5min。4.PCR产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染检测：取PCR产物10μl加入2μl载样缓冲液(0.05%溴酚蓝-30%甘油)，加样于6%非变性聚丙烯酰胺凝胶中，300V电泳2h。电泳完毕取出凝胶先后于10%乙醇-0.5%乙酸溶液中固定10min，0.2%AgNO3溶

8、液染色10min，及1.5%NaOH-0.5%甲醛溶液显色10min，最后以10%乙酸溶液终止反应。结果30例无FXS家族史孕妇外周血检测FMR1基因(CGG)n重复序列PCR扩增结果均见正常扩增带，表明为非FXS患者及FXS前突变携带者;胎儿羊水细胞FMR1基因检测亦均见正常扩增带。羊水细胞的X