春夏两季杨梅树叶部精油成分及抗氧化活性比较研究论文

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1、春夏两季杨梅树叶部精油成分及抗氧化活性比较研究论文钟瑞敏，张振明，肖仔君，王羽梅，曾庆孝【摘要】目的探讨不同季节乌杨梅叶部精油成分与抗氧化活性的差异。方法采用GC-MS联用技术结合Kovats保留指数对比法分析了春夏两季乌杨梅鲜叶精油的成分，运用DPPH自由基清除法、β-胡萝卜素漂白法和硫代巴比妥酸法对精油抗氧化活性进行了综合对比分析。结果春季精油产量(0.13%)高于夏季(0.05%)，春季精油成分以倍半萜烯含氧衍生物为主(占52.69%)，夏季精油则以倍半萜烯为主(占70.04%).freela,美国)，

2、AAPH自由基2,2′-Azobis(2-methylpropionamidine)dihydrochioride(Aldrich，美国)，硫代巴比妥酸(Sigma，USA),β-胡萝卜素(Sigma，USA)，2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)和抗坏血酸均为分析纯。1.2仪器芳香精油测定仪(广州玻璃厂)，气质联用仪(FinniganTRACE/DSQ，美国热电)，紫外可见分光光度计(916型，澳大利亚GBC)。2方法2.1精油提取与含量测定采用水蒸气同步蒸馏法提取精油。沸蒸回流3h。精油用无水硫酸钠脱水，过滤

3、后取适量正已烷溶解稀释为1×10-3(V/V)浓度用于气质联用分析。样品测定前均置于-25℃下贮存。2.2气质联用分析GC-MS分析采用韶关学院实验中心TRACEGC/DSQ气质联用仪完成。GC条件：色谱柱为DB-5石英毛细管柱，30m×0.25mm×0.25μm;载气为高纯氦(99.999%);柱流量1ml·min-1;不分流进样;进样口温度220℃;传输线温度210℃;进样量1μl。程序升温，柱温40℃(1min)-10℃(/min)-200℃(3min)。MS条件：电离方式EI，电子能量70eV，发射电

4、流100mA，离子源温度200℃，质量扫描范围50-350m/z，溶剂延迟4min。C8-C21系列正烷烃均以1×10-3(V/V)浓度用正己烷溶解，与上述GC条件一样进样测定。杨梅叶精油被GC分离的各成分用下面的线性升温公式计算其KI18：KI=100n+100(tx-tn)/(tn+1-tn)其中tx为测定物质的保留时间，tn和tn+1分别为碳原子数相差为1的正烷烃的保留时间(tntxtn+1)结果用随机所带的美国NISTLibrary(2002版)质谱库检索，并与相应标准KI值18对比确定，无标准KI值

5、的组分只用质谱库检索结果确定。相对含量的确定采用峰面积归一化法。2.3抗氧化性评价试验2.3.1DPPH自由基清除率测定配制浓度分别为4，8，10，16，24，32和50g·L-1的受试样品甲醇液。分别取200μl与4ml浓度为6×10-5MDPPH甲醇液混合，于517nm处测定吸光度，不加样的DPPH甲醇液为空白样。平行样为3个。自由基清除率按下式计算自由基清除率(%)=(AC(0)–AA(t))/AC(0)×100%其中AC(0)为t=0h时的空白样吸光度值;AA(t)为t=1h时样品吸光度值。2.3.2

6、β-胡萝卜素漂白试验法将β-胡萝卜素(0.1mg)用氯仿(10ml)于梨形瓶中溶解，加入亚油酸(20mg)和吐温40(100mg)，然后于50℃旋转真空干燥。加入50ml含氧蒸馏水，于超声波中形成乳化液A。取200μl浓度分别为4，8，12，16和20g·L-1的受试样品乙醇液与5ml乳化A液于试管中混合，不加样品的用等量乙醇代替与A液混合作为空白样。在50℃保温，于470nm测定吸光度。平行样为3个。抗氧化率用下式计算抗氧化率(%)=(AA(120)–AC(120))/(AC(0)–AC(120))×100

7、%其中AA(120)为t=120min时的样品吸度度，AC(120)为t=120min时空白样吸光度值，AC(0)为t=0min时的空白样吸光度值。2.3.3硫代巴比妥酸法分别取0.1ml浓度为5，25，50g·L-1的样品甲醇液与0.5ml蛋黄乳浊液混合，加入50L的AAPH自由基溶液(0.07mol/L)引发脂质过氧化反应。随后即加入1.5ml乙酸溶液(20%)和1.5ml浓度为0.8%硫代巴比妥酸液用1.1%(S分析采用水蒸气同步蒸馏法测得乌杨梅春季鲜叶精油含量为0.13%±0.04%(V/atsuda

8、H,.freeledicine.VII.InhibitorsofdegranulationinRBL-2H3cellsandabsolutesterostructuresofthreenethebarkofMyricarubraJ.Chem.Pharm.Bull.2002,50:208.3TakedaY,FujitaT,andShinguT,etal.Studiesonthebacterialgal