胸腺细胞渐进性凋亡对大鼠脾脏淋巴细胞增殖功能的影响

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1、胸腺细胞渐进性凋亡对大鼠脾脏淋巴细胞增殖功能的影响作者：陈海英陈建明郑建盛【摘要】目的：研究胸腺内胸腺细胞电镜结构的渐进性、增龄性凋亡等形态学改变，探讨引起脾脏淋巴细胞增殖功能变化的可能机制。方法：光镜、电镜下观察胸腺主要结构的增龄性变化，测试凋亡细胞数。脾脏淋巴细胞增殖实验，脾脏组织流式细胞仪检测细胞凋亡率。并统计学分析。结果：在光镜下观察显示随着年龄增长，胸腺皮、髓质分界不清，胸腺细胞稀疏。电镜下胸腺细胞退化萎缩，出现大量凋亡小体。胸腺细胞凋亡百分率与成年年龄正相关（P<0.05），脾脏内淋巴细胞在进入老年后才出现凋亡。成年组脾脏淋巴细胞增殖活性就开始出现明显增强（

2、P<0.05）。结论：随着鼠龄增大，而胸腺比脾脏内淋巴细胞更易于凋亡，胸腺细胞凋亡直接或间接促进脾脏淋巴细胞增殖功能。【关键词】胸腺细胞；凋亡；脾脏；淋巴细胞转化；退化萎缩AbstractObjective：Tostudytheelectronmicroscopicgraduallymorphologicchangeandapoptosisofthestructualocytesinrat;andtoexploreitspossiblemechanismofproliferationoflymphocytesofrat’sspleens.Methods：Thestruc

3、turechangesofthethymusicroscopicmethods,testingapoptosiscountsofthecells,thedetectionofspleenslymphocyteproliferation.FloetryDetectionofApotosisrateinSpleensakestatisticsanalysis.Results：TT)：由南京建成生物工程公司提供。动物分三组。幼年组：出生1周内；成年组：8周～10周龄；老年组：18月龄。每组10只，雌雄不分。正常饮水及饲料，适应性喂养。1.2脾脏淋巴细胞增殖实验处死大鼠，无菌操作取少

4、量脾脏组织，用生理盐水漂洗其表面血污，用眼科剪剪成肉糜状，加有1mLPBS的小平皿内轻轻研磨分别制成脾脏单细胞悬液。将细胞液加入24孔培养板，细胞数5×106个/孔，培养板置于37℃，应用PHA诱导,以MTT比色分析法620nm酶标仪测定吸收度的大小。1.3流式细胞仪检测无菌操作研磨胸腺、脾脏组织，300目尼龙网过滤，离心，冷乙醇固定。制备脾细胞悬液，计数细胞终浓度1×106个/mL，流式细胞仪检测，计数10000个细胞，测定细胞凋亡率。1.4光镜标本的制备各组大鼠用戊巴比妥腹腔内注射麻醉后开胸，摘取部分胸腺组织，入10%甲醛溶液固定，按常规制成石蜡包埋块，切片机（德国LEi

5、caRM2015）以5μm连续切片，常规苏木精-伊红（HE）染色。1.5组织学观察图像分析光学显微镜（日本OlympusBX51T-PHD-J11）观察。进行200×和400×的显微照相，编号、采集、分析存盘。1.6凋亡细胞数计算每张玻片随机观察200个细胞，计数凋亡细胞数。每组观察4张玻片。计算凋亡率：凋亡率（%）=凋亡细胞数/观察细胞数（200个）×1001.7电镜标本的制备紧贴胸腺表面取材，取胸腺皮质切成1mm3小块迅速固定于2.5%戊二醛磷酸缓冲溶液，反复洗涤后用1%锇酸溶液作后固定，乙醇系列脱水，环氧树脂包埋，超薄切片。醋酸铀与柠檬酸铅染色，H-600型电子显微镜观

6、察与摄片。1.8统计学处理所有实验数据用SPSS10.0软件处理，采用单因数方差分析，两两比较用S-N-K法。以x±s进行t检验,以P<0.05为差异有显著性。2结果2.1胸腺组织结构幼年组胸腺小叶结构明显，皮质较厚，被膜下胸腺细胞密集，大小一致。位于中央的髓质呈散在的斑点状，含少量的胸腺细胞，较多的上皮性网状细胞，着色浅；胸腺小体个体小且少。皮、髓质分界清楚。成年组大鼠的胸腺皮质变薄，主要由胸腺细胞和上皮性网状细胞构成，细胞间隙变宽，髓质结构疏松，上皮性网状细胞增多，胸腺细胞数量减少。老年组胸腺脂肪、纤维增多，小叶间隔变宽；胸腺细胞体积变小，细胞间隙增大。2.2胸腺电

7、镜结构2.2.1胸腺细胞分布与结构变化：幼年组胸腺细胞多呈圆形或卵圆形，被膜内侧皮质浅层细胞排列紧密，近髓质区域细胞较小，核约占细胞体积的4/5，细胞内游离核糖体较多。上皮性网状细胞体大向深部组织延伸并包绕周围的胸腺细胞（见图1）。成年组细胞均匀分布，部分胸腺细胞内内质网增生肿胀扩张呈囊泡状。散在少量凋亡细胞，核裂解成团快状，偶见部分细胞内质网肿胀扩张，呈大小不等的囊泡状（见图2）。老年组胸腺细胞间隙增宽，细胞轮廓不清；核肿胀、固缩；胞内游离核糖体、线粒体均减少。偶见胞核浓缩、边集的游离的凋亡细胞或由质