寒冷缺氧降低大鼠脾脏t淋巴细胞的增殖反应

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1、寒冷缺氧降低大鼠脾脏T淋巴细胞的增殖反应【摘要】目的观察缺氧和寒冷对大鼠脾脏T淋巴细胞功能的影响及其与腺苷脱胺酶之间的关系，探讨冬季急进高原时机体免疫功能改变的规律和机制。方法大鼠分别在常温常氧、寒冷常氧、常温缺氧以及寒冷缺氧环境中生活3d，用3HTdR掺入法检测脾脏T淋巴细胞增殖功能，用比色法测定脾脏T淋巴细胞腺苷脱胺酶活性。结果与常温常压对照组比较，单纯寒冷或单纯缺氧均可引起脾脏T淋巴细胞在刀豆素A刺激下的刺激指数显著降低，但缺氧复合寒冷大鼠脾脏T淋巴细胞的刺激指数并未进一步降低，而是接近单纯缺氧大鼠。单纯缺

2、氧和单纯寒冷并不改变大鼠脾脏T淋巴细胞上的腺苷脱胺酶活性，而缺氧复合寒冷则使其显著降低。结论缺氧和寒冷均可抑制脾脏T淋巴细胞的功能，但两者对脾脏T淋巴细胞功能的影响可能并无叠加效应；腺苷脱氨酶活性的改变可能参与寒冷缺氧大鼠脾脏T淋巴细胞功能的降低。【关键词】缺氧寒冷T淋巴细胞腺苷脱氨酶　　EffectsofhypoxiaandcoldonthespleniclymphocyteproliferationinratAbstract:ObjectiveToexploretheeffectsofhypoxiaandcol

3、donsplenicTlymphocytesproliferation.MethodsI1640的培养液中，37℃、5%CO2孵箱中培养54h后，每孔加入1.0μCi3HTdR，继续培养18h。用多头细胞收集器将细胞收集在滤纸上，用Beckman公司生产的液体闪烁记数仪测定放射活性。每个ConA浓度点做5复孔。计算刺激指数（SI）。1.3脾脏T淋巴细胞腺苷脱胺酶（ADA）活性测定各组另取10只大鼠，同上制备淋巴细胞。准确记数淋巴细胞的数目，离心后，沉淀加入2ml蒸馏水，反复冻融10次，显微镜下确认细胞破裂后，按G

4、iustiG［2］报道的方法测定620nm处的吸光度（UV240分光光度计，日本岛津公司）。以每106个淋巴细胞样品37℃作用于腺苷60min所产生氨氮的微克数作为酶的活性单位（U/106个淋巴细胞）。1.4实验数据的统计学分析实验结果以均数±标准差（±s）表示。用SPSS软件进行双因素方差分析，P＜0.05为显著性判断标准。2结果2.1动物体重的变化常温常氧对照组和寒冷常氧组大鼠体重无明显变化，而在常温缺氧环境中生活3d的大鼠和在寒冷缺氧环境中生活3d的大鼠体重却明显降低。说明缺氧可引起动物体重降低；而在寒冷缺

5、氧环境中，动物体重的降低可能主要是由缺氧引起的(表1)。表1各组动物体重的变化2.2大鼠脾脏T淋巴细胞增殖反应结果比较对照组大鼠脾脏T淋巴细胞，5.0μg/mlConA的刺激指数为（64.0±23.7）；2.5μg/mlConA的刺激指数为（43.5±21.7）。动物从20~25℃进入0~2℃环境中生活3d后，用5.0μg/mlConA刺激时，3HTdR的掺入量明显降低；而用2.5μg/mlConA刺激时，无明显变化。常温缺氧条件下生活3d的大鼠，脾脏T淋巴细胞在两个浓度ConA刺激下的3HTdR的掺入量均显著

6、降低，刺激指数显著下降；大鼠在寒冷缺氧环境中生活3d后，脾脏T淋巴细胞在5.0μg/mlConA刺激下的3HTdR的掺入量与常温缺氧和寒冷常氧组相比，未见进一步降低；而在2.5μg/mlConA刺激下的3HTdR的掺入量与常温缺氧组相比未见明显差异，但显著低于寒冷常氧组(表2)。表2大鼠脾脏淋巴细胞增殖反应(刺激指数)2.3脾脏淋巴细胞腺苷脱胺酶活性测定脾脏淋巴细胞腺苷脱胺酶活性测定结果见表3。表3脾脏淋巴细胞ADA活性测定结果3讨论本实验发现缺氧和寒冷均可在一定程度上抑制脾脏T淋巴细胞的增殖反应。当动物处于寒

7、冷缺氧环境中时，T淋巴细胞在2.5μg/mlConA刺激下的3HTdR掺入量接近于单纯缺氧组动物，但显著低于单纯寒冷组，说明缺氧和寒冷两者对脾脏T淋巴细胞的增殖反应可能并无叠加效应；在寒冷缺氧环境中，脾脏T淋巴细胞增殖反应降低可能主要是由机体缺氧引起的。高原环境对人体的影响主要因素是缺氧。为对抗外环境缺氧的影响，机体通过各种神经内分泌调节，以维持内环境的相对稳定。缺氧时，机体神经内分泌系统的变化，可能通过免疫细胞上的受体，影响机体的免疫功能［1］。本实验结果表明，缺氧可在一定程度上抑制脾脏T淋巴细胞的增殖反应。C

8、ald减压缺氧20min就可引起人体免疫系统显著改变。Loeffler等［5］在研究肿瘤免疫时发现，肿瘤无氧区的T细胞浸润数量虽无明显变化，但其功能显著降低。急性缺氧时，T细胞功能改变，可能在急性高原病的发生发展中起重要作用。但有人发现，缺氧对免疫功能的影响，不能完全用肾上腺皮质反应增强来解释，因为在切除肾上腺的大鼠，缺氧对免疫功能的影响依然存在［6］。腺苷