中药复方促使ｔ淋巴细胞增殖的实验研究

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1、中药复方促使Ｔ淋巴细胞增殖的实验研究【摘要】目的研究中药复方促使T淋巴细胞增殖。方法从SD大鼠血液里分离淋巴细胞，进行体外培养。设正常细胞对照组、阳性药物对照组、转移因子组、复方中药高剂量组、中剂量组、低剂量组。培养1d后把药加入培养液中，继续培养2d，加Am-Blue细胞增殖与活性检测试剂，避光培养4h后，通过酶标仪检测，分析淋巴细胞的增值情况。结果中药复方高、中、低剂量组OD值均明显增高，与空白组比较P＜0.01；与阳性药物对照组比较，P＜0.01；高剂量组与中、低剂量组比较P＜0.01；转移因子组与空白组比较P＜0.01。结论中药复方能促使T淋巴细胞增殖，且与剂量有关。　　【关

2、键词】中药复方；T淋巴细胞；增殖　　　　【Abstract】ObjectiveStudyofpoundtraditionalChinesemedicinecanpromotetoT-lymphocyteproliferation.MethodsSeparateT-lymphocytefrombloodofSDrat,cultureinvitro.Installnormalcellcontrolgroup,active-drugcontrolgroup,transferfactorgroup,poundtraditionalChinesemedicinehighdosegroup、mi

3、ddledosegroup，loedicinetoculturemediumaftercultureoneday.Continuetoculture2daysandtakeAm-Blueinto96orificeplate,culture4hoursindark.Useenzyme-labellingmeasuringinstrumenttomeasureafterthreedays.AnalyseproliferationofT-lymphocyte.ResultsODofpoundtraditionalChinesemedicinehighdosegroup、middledose

4、group、loproveobviously.TheirsparetoblankcontrolgroupP＜0.01;theirsparetoActive-drugcontrolgroupP＜0.01;poundtraditionalChinesemedicinehighdosegroupparetomiddledosegroup、loedicinecanpromotetoT-lymphocyteproliferation,andrelationtodosage.　　【Keyedicine;T-lymphocyte;Proliferation　　　　转移因子(Transferfact

5、orTF)是从致敏动物的白细胞或脾脏、淋巴结等免疫器官中提取的一种低分子量多肽—核苷酸复合物，因其能将供体某种特定的细胞免疫功能特异地转移给受体，故称为转移因子。目前对转移因子的研究很多，本研究通过转移因子与中药的复方来研究中药复方对体外培养的大鼠淋巴细胞的影响作用，分析复方转移因子各种组别对细胞增殖的影响及与剂量的关系，为后续的体内试验提供参考依据，探讨复方中药免疫增强作用和对复方转移因子的临床应用开发奠定基础。　　1材料与方法　　1.1实验材料　　1.1.1动物SD大鼠，雄性，体质量（180±10）g，清洁级动物，中科院上海实验动物中心提供。　　1.1.2实验室气象条件温度22℃

6、～25℃，湿度40%～70%。　　1.1.3试剂与仪器　　1.1.3.1试剂淋巴细胞分离液（Sigma公司）、RPMI1640培养液、胎牛血清（FCS）、Am-Blue细胞增殖与活性检测试剂（SunBioTM公司）、PHA（植物凝集素）、IL-2（Sigma公司）；复方转移因子，本实验室制备。健康猪脾，用超滤仪超滤，得转移因子溶液（10mg/ml左右）。中药（紫花地丁、野菊花、甘草等）煎煮2次，浓缩后加食用酒精提取。二者按一定的比例混合，得复方中药。复方中药中的转移因子含量为0.05g/10ml和中药生药含量为5g/10ml。　　1.1.3.2仪器CO2培养箱（RSBiotech公司

7、））、Elx800酶标仪（美国BIO-TEK公司）。　　1.2方法　　1.2.1采血　　每次试验均先麻醉SD大鼠，用5ml注射器（预先抽取0.2ml肝素）从大鼠腹主动脉抽血　　3ml。　　1.2.2分离　　将血液缓慢加入预先已加入淋巴细胞分离液的离心管中，血液与分离液的比例为1∶1。以　　4℃、2000r/min离心20min，液相分为三层，上层为自体血清层，中层为淋巴细胞层（乳白色云雾状），下层为分离液和红细胞层。用微量进样器抽取淋巴细胞放入无菌的离心管