不同培养条件下脂肪干细胞与软骨细胞共培养的研究

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1、不同培养条件下脂肪干细胞与软骨细胞共培养的研究.L.编辑。【摘要】探讨病理状态下软骨细胞能否诱导脂肪干细胞(ADSC)向软骨细胞分化以及可能的最佳条件，以便为临床修复关节软骨损伤提供可能的新途径。［方法］分离共培养新西兰大白兔骨关节炎模型的ADSC和软骨细胞，根据不同血清浓度（10％FBS和2％FBS）和不同培养空间（纤维蛋白凝胶支架和无支架单层培养）分组，共培养14d后，胰酶消化终止。倒置显微镜观察和透射电镜观察共培养后ADSC的形态变化。甲苯胺蓝染色法和免疫细胞化学检测共培养后ADSC的蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达水平。RTPCR检测蛋白多糖和Ⅱ型胶原的基因

2、转录水平。［结果］共培养7d后部分ADSC变圆，14d时ADSC形态高度分化与成熟软骨细胞相似，其蛋白多糖和Ⅱ型胶原的基因转录和蛋白表达均增高，尤以10％FBS支架共培养组最为明显。［结论］与病理状态下软骨细胞共培养后，ADSC可以被诱导成软骨样细胞。高浓度血清三维培养可以增强这种诱导作用。【关键词】脂肪干细胞；软骨细胞；共培养；组织工程Abstract：［Objective］Toinvestigatethefeasibilityandoptimalconditionofinvitrochondrogenesisbycocultureofadiposeder

3、ivedstemcell(ADSC)andchondrocytesinpathologicstatesoastoprovideaneagedarticularcartilage.［Method］ADSCandaricularchondrocytesfromosteoarthritismodelinadultNeillicelldishrespectively.Thecoculturecellsconcentration(10%FBSand2%FBS)anddimensions(fibrinscaffoldandmonolayer).Theculturemed

4、iumicroscopeandtransmissionelectronmicroscope.TheexpressionofaggrecanandtypeⅡcollagengenesinADSCmunohistochemistryafterinvitrococulturefor14days.AndthetranscriptionofaggrecanandtypeⅡcollagengenesinADSCorphologically.Andtheybecameroundat7daysafterinvitrococulture.At14daysaftercocu

5、ltureorphologicallyandincreasedimmunostainingparticlesoftypeⅡcollagenandenhancedtoluidinebluestaining.AndthetranscriptionoftypeⅡcollagenandaggrecangenesayprovidechondrogenicmicroenvironmenttoinducechondrogenicdifferentiationofADSCinvitro,concentrationandthreedimensionalculture.Keyc

6、ell;articularchondrocytes;coculture;tissueengineering关节软骨损伤的修复一直是骨科医生面临的巨大挑战。软骨组织工程为解决这一难题提供了新的方法。由于软骨细胞来源少，增殖有限，不能满足临床需要。因此，具有强大增殖和多向分化能力的干细胞，尤其是脂肪来源的间充质干细胞（adiposederivedstemcell，ADSC）已成为软骨组织工程研究的热点［1,2］。然而，传统诱导干细胞的方法需要大量的生长因子，费用高，难以有效应用于临床。已知正常关节软骨微环境可以诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。由于临床上关节软

7、骨损伤多见于陈旧性损伤或关节疾患，目前对病理状态下的关节软骨是否能诱导ADSC向软骨细胞分化尚不清楚。本研究通过在不同血清浓度（10％FBS和2％FBS）和不同空间（纤维蛋白凝胶支架和无支架单层）共培养来源于新西兰大白兔骨关节炎模型的ADSC和软骨细胞，探讨病理状态下软骨细胞是否能诱导ADSC向软骨细胞分化以及可能的最佳条件，以便为临床修复软骨损伤提供可能的新方法。1材料与方法1.1材料1.1.1动物清洁级成年新西兰大白兔，雌雄不限，体重1.5～2.0kg，由南京军区南京总医院比较医学科提供。1.1.2试剂DMEM培养液和胎牛血清购自Gibco公司，Ⅰ、Ⅱ型胶

8、原酶、逆转录酶、β-磷酸甘油钠、TGF