蟾毒灵的大鼠在体肠吸收机制研究论文

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1、蟾毒灵的大鼠在体肠吸收机制研究论文刘颖冯年平许洁巫珊张欣【摘要】目的研究蟾毒灵的大鼠在体肠吸收机制。方法采用大鼠在体肠单向灌流吸收实验模型,并应用重量法校正灌流液体积,考察吸收部位、药物浓度、pH值及P-糖蛋白(P-gp)抑制剂对药物吸收的影响。结果蟾毒灵的吸收速率常数(Ka)和表观吸收系数(Papp)分别按照空肠、回肠、十二指肠、结肠的顺序下降。2~20μg·ml-1的药物浓度对Ka和Papp无显著影响(P>0.05);灌流液pH值对药物吸收有影响;含P-gp抑制剂组与不含P-gp抑制剂组相比,Ka和Papp无显著性差异(P>0.05)。结论蟾毒灵为全肠段吸收,吸收机制为被动扩

2、散,且P-gp对药物的小肠吸收基本无影响。【关键词】蟾毒灵;肠吸收;单向灌流Abstract:ObjectiveToevaluatebufalininsituintestinalabsorptionmechanism.MethodsTheratsingle-passintestinalperfusiontechniqueetrye.TheconcentrationofbufalininedbyHPLC.Theeffectsofabsorptionsite,drugconcentration,pHvalueandP-glycoprotein(P-gp)inhibitoronbufa

3、linabsorption>ileum>duodenum>colon.DrugconcentrationhadlittleeffectonKaandPapp(P>0.05).pHvalueofthedrugsolutionaffecteddrugabsorption.Thereents.TheabsorptionofbufalinisapassivediffusionprocessandnotaffectedbyP-gp.KeyBufonis中的一种有效成分。蟾毒灵具有较强的抗肿瘤作用,作用机制涉及诱导细胞凋亡、分化、抑制肿瘤的血管生成等[1~3]。近些年,有学者对蟾毒灵脂质体、

4、透皮给药制剂等方面进行研究报道[4.freela公司);盐酸维拉帕米标准品(中国生物制品检定所)。空白灌流液(Krebs-Ringer's营养液,自配,每1000ml含NaCl7.8g,KCl0.35g,NaHCO31.37g,NaH2PO40.32g,MgCl20.02g,葡萄糖1.4g);甲醇(色谱纯,上海安谱科学仪器有限公司);其余试剂均为分析纯。1.2仪器HL-2B数显恒流泵(上海沪西分析仪器厂);红外灯(上海安大照明电器有限公司);Angilent1200series高效液相色谱仪;AgilentG1314A紫外检测器;Agilent8453紫外-可见分光光度计;BP2

5、10S电子天平(德国Sartorius);PHS-3S型pH计(上海精密科学仪器有限公司);DKB-501A型超级恒温水槽(上海精宏实验设备有限公司)。1.3动物SD大鼠,清洁级,雄性(200±20)g,上海中医药大学实验动物中心提供,合格证号SCXK(沪)2003-0002。2方法与结果2.1HPLC分析方法的建立2.1.1色谱条件色谱柱为DiamonsilODSC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm,columnNo:99903);流动相为甲醇∶水(70∶30);流速1.0ml·min-1;柱温30℃;检测波长300nm;进样量20μl。2.1.2方法学验证用Krebs

6、-Ringer's营养液分别配制蟾毒灵溶液、维拉帕米溶液。分别取上述两种溶液及空白Krebs-Ringer's营养液进样,在“2.1.1”项下色谱条件下测定,色谱图如图1~3所示。空白Krebs-Ringer's营养液及维拉帕米在此条件下对蟾毒灵的测定均无干扰。精密称取蟾毒灵对照品适量,用空白Krebs-Ringer's营养液配制0.2,1.0,2.0,5.0,10.0,15.0,20.0μg·ml-1的蟾毒灵溶液,进样,测定。以蟾毒灵峰面积(A)对浓度(C)作线性回归,得蟾毒灵的标准曲线方程为:A=13.107C-0.4766,r=0.9995(n=3)。线性范围0.2~20μ

7、g·ml-1。高、中、低3种浓度的回收率为98.2%~101.1%(n=5),日内、日间精密度RSD均小于2%(n=5)。图1空白Krebs-Ringer's营养液HPLC图(略)2.2蟾毒灵在肠灌流液中的稳定性考察用空白Krebs-Ringer's营养液分别配制高(20μg·ml-1)、中(10μg·ml-1)、低(2μg·ml-1)浓度的蟾毒灵溶液作为供试液,置于37℃恒温水浴中,分别于0,30,60,90,120min取样,按“2.1.1”项下色谱条件测定,并计算浓度。在1

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