树突细胞免疫对hpv感染阳性角朊细胞生物学特性影响论文

《树突细胞免疫对hpv感染阳性角朊细胞生物学特性影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、树突细胞免疫对HPV感染阳性角朊细胞生物学特性影响论文.freelavirus，human;ker-atinocyte;cellcycle;T-lymphocytes，cytotoxicAbstract:AIMToinvestigatethecharacteristicchangeofHPVinfectionpositivekeratinocytes（HIPK）incultureafterdendriticcellimmunization.METHODSByparingthedifferenceofthegroetreassay，DNAcontent

2、andcellcycleofHIPKetre（FCM）assay，phocyte（CTL）toHIPKmunization，theHIPKproliferatione（Dt）ofHIPK（P0.01）munizationcanrestrainproliferationofHIPKasing的机制诱导出MHCⅠ类限制性的CD8+CTL.目前用肿瘤抗原肽、肿瘤细胞裂解物、肿瘤细胞RNA体外冲击DCs或将TAA基因转移到DCs内，有效诱导活化特异性的CTL均被认为是颇有前途的肿瘤治疗方案［1-3］.人乳头瘤病毒（HPV）是一种常常感染复层上皮细胞并引起乳头

3、瘤样改变及良恶性肿瘤的小DNA病毒.传统的治疗方法效果差，复发率高，主要与感染HPV患者不能产生有效的细胞免疫有关［4］.树突细胞免疫治疗HPV感染引起的尖锐湿疣，效果较好，因而也是一种颇有前途的治疗方法［5］.我们观察了树突细胞免疫对HIPK增殖特性的影响及诱导杀伤性T淋巴细胞（CTL）细胞毒活性的变化.1材料和方法1.1材料HPV感染阳性角朊细胞、正常角朊细胞系为本所培养.树突细胞按文献［6］获取.实验组效应细胞为HPV感染阳性角朊细胞提纯抗原冲击人外周血树突细胞后，免疫病人4LL-1CO2，37℃.培养基为RPMI1640培养液含100mLL-

4、1小牛血清和抗菌素（青霉素0.1uL-1，链霉素0.1uL-1）.1.2方法①生长曲线测定:采用细胞计数法［7］.将HIPK以5×104/孔的密度接种24孔板，分8组，每组3个复孔，培养12d，每3d换液1次，其中一组每次换液时加入HPV抗原刺激DCs24h培养上清0.5mL.第4日开始计数，每日检测一组，根据原始数据绘制细胞生长曲线，计算倍增时间.②细胞周期的测定:收集细胞，PBS洗涤两次，700mL.L-1乙醇固定，加入DNA-Prepstain染液500μL染色DNA20min，ELITEESP型流式细胞仪（FCM）测定每个细胞的荧光强度，每份

5、标本检测10000个细胞，用DNAMultiCycle软件进行统计学拟合分析.③CTL的杀伤活性检测用51Cr释放法测定树突细胞免疫前后细胞毒性淋巴细胞（CTL）对HIPK的细胞毒作用［8］.于96孔培养板中加入不同的效应细胞和靶细胞比例10∶1，5∶1，2∶1（每种比例重复3孔）.特异性51Cr释放率按如下公式计算:［（a-b）/）（c-b）］×100，a是效应细胞作用后靶细胞上清的放射活性，b是自发释放放射活性，c是最大释放放射活性.统计学处理:应用METLAB，SPSS及EPI6软件进行统计学分析.2结果2.1细胞生长曲线及倍增时间以培养4～1

6、2d的细胞数作图，绘制出细胞生长曲线.DC细胞培养上清作用下细胞生长曲线上升较缓，生长率明显低于对照HIPK，HIPK倍增时间为24.7h，DC细胞培养上清作用后HIPK倍增时间为41.6h，HIPK细胞生长数量明显减少，速度减慢（Fig1）.2.2树突细胞免疫对HIPK细胞周期及CTL的影响FCM检测树突细胞免疫前后HIPK细胞的DNA含量，经计算机处理，得出G0/G1，S，G2/M各时相细胞百分比（%）.对照组HIPK分别为:0.58，0.28，0.14;DC细胞培养上清组分别为0.62，0.24，0.14.两者PI比较差异显著（P0.01vsC

7、on-trol）照组HIPK没有观察到凋亡，而DC细胞培养上清作用组却观察6.8%的凋亡率.，DC治疗前后CTL活性有明显差别（Fig2（略））.3讨论在某些情况下，由于CTL关键表位的改变，多肽抗原与MHC的结合受表位的突变，多肽抗原与MHC的结合受到抑制，或TCR的识别过程受到影响，则可能影响免疫应答过程而导致病毒逃避现象的产生［9-11］.抗原呈递过程中，病毒编码蛋白所引起免疫逃避的有以下几个主要方面.①抗原呈递过程中的病毒免疫逃避.在依靠MHCⅠ类分子限制的CD8+细胞毒T细胞来清除被病毒感染的细胞这一过程中，病毒编码了一些蛋白产物影响抗原呈

8、递过程的各个环节（如蛋白酶降解作用［12，13］、抗原多肽的运输14，15］、MHCⅠ类分子的形成［16-1