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1、SELDI技术分析体外培养不同肝细胞株差异蛋白的表达论文丁守怡，钱冬萌，牟文凤，闫志勇，宋旭霞，王斌【关键词】表面增强激光解吸/离子化/飞行时间质谱；蛋白质陈列分析；肝肿瘤；肿瘤细胞,培养的；差异蛋白AnalysisofdifferentproteinexpressionsindifferentlivercellstrainsinvitrousingSELDI【Abstract】AIM:Toexaminethedifferentialexpressionsofproteinsinhepatomacellline(HepG2),
2、hepatomacelllinetransfectedbyHBV（HepG2.2.15）paredallivercellline(LO2)byusingsurfaceenhancedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry(SELDITOFMS),soastoestablishafoundationforfurtherstudyingonthemechanismofhepatomaattheproteinlevel.METHODS:The3typesofcel
3、lsabovementionedployedtodetectthedifferentialexpressionsofproteomesofHepG2,HepG2.2.15andLO2.RESULTS:Niyoneproteinsallivercelllines,inthesegmentsfromMr5000to15000,proteinsintheHepG2andHepG2.2.15shoacells,theother5decreased.NineproteinsinHepG2ethodindetectingthebiolog
4、icalmarkersintheearlierperiodofhepatoma.Thismethodisofconvenience,highsensitivity,andgoodreproducibility.Thebiologicaltagsoftissuespecificproteinsa.Thesetagsarealsomeaningfulinscreeningandidentifyingsignalproteinsfromserumandtissuespecimenindifferenttypesofhepatoma.
5、Certainfoundationhasbeenestablishedinstudyingtheetiopathogenesisofhepatomaatthelevelofproteins,ass;tumorcells,.freelRNA的水平并不能真正代表所表达的蛋白质水平，因此，要求对生物功能的执行者蛋白质进行研究.蛋白质组是指一个基因组、一个细胞或组织或一种生物体所表达的全部蛋白质［1］.蛋白质组学（Proteomics）是蛋白质组概念的延伸，是在整体水平上研究细胞内蛋白质组成及其活动规律的学科.蛋白质组学技术为研究肿瘤
6、标志物与肿瘤进展转移研究提供良好的技术平台,为研究开辟了新的手段和视角.SELDI蛋白质芯片技术是近年来新兴的一种蛋白质组学技术，它具有简单、快捷、灵敏等特点，可以检测分子量在Mr500~500000之间的蛋白或多肽，而且所需样本体积小（0.5~400μL）［2-3］.我们应用细胞裂解液裂解体外培养的3种细胞（LO2,HepG2,HepG2.2.15），进行了表面增强激光解吸/离子化/飞行时间质谱技术（SELDITOFMS）分析，初步建立了正常肝细胞、肝癌细胞与转染乙肝病毒的肝癌细胞的蛋白表达图谱［4］，发现了一系列（信噪比）
7、差异表达的蛋白，为今后从血清或肝癌组织中筛选标志蛋白提供科学依据.1材料与方法1.1材料正常肝细胞株（LO2）购自中科院上海细胞库；肝癌细胞株（HepG2）及携带乙肝病毒的肝癌细胞株（HepG2.2.15）由第四军医大学吴力克主任医师赠送.HPLC水，乙晴，三氟乙酸，白芥子酸（SPA）,TritonX100，尿素，4羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES），表面活性剂（CHAPS）均购自美国Sigma公司，蛋白质芯片时间质谱分析仪（PBSⅡC）及（SPA中加入75μL乙氰和75μL10mL/L三氟乙酸）重复1次.干燥后用蛋白质芯片阅读机
8、进行质谱分析.1.2.3数据采集和结果分析用加有Allinone标准分子量蛋白的NP20芯片校正质谱仪，仪器参数设置如下：激光强度220，检测敏感度10，优化分子质量范围为Mr2000~10000,最高分子量为Mr50000,采用CiphergenProteinChip3.0
