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1、SELDI技术分析体外培养不同肝细胞株差异蛋白的表达论文丁守怡,钱冬萌,牟文凤,闫志勇,宋旭霞,王斌【关键词】表面增强激光解吸/离子化/飞行时间质谱;蛋白质陈列分析;肝肿瘤;肿瘤细胞,培养的;差异蛋白AnalysisofdifferentproteinexpressionsindifferentlivercellstrainsinvitrousingSELDI【Abstract】AIM:Toexaminethedifferentialexpressionsofproteinsinhepatomacellline(HepG2),
2、hepatomacelllinetransfectedbyHBV(HepG2.2.15)paredallivercellline(LO2)byusingsurfaceenhancedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry(SELDITOFMS),soastoestablishafoundationforfurtherstudyingonthemechanismofhepatomaattheproteinlevel.METHODS:The3typesofcel
3、lsabovementionedployedtodetectthedifferentialexpressionsofproteomesofHepG2,HepG2.2.15andLO2.RESULTS:Niyoneproteinsallivercelllines,inthesegmentsfromMr5000to15000,proteinsintheHepG2andHepG2.2.15shoacells,theother5decreased.NineproteinsinHepG2ethodindetectingthebiolog
4、icalmarkersintheearlierperiodofhepatoma.Thismethodisofconvenience,highsensitivity,andgoodreproducibility.Thebiologicaltagsoftissuespecificproteinsa.Thesetagsarealsomeaningfulinscreeningandidentifyingsignalproteinsfromserumandtissuespecimenindifferenttypesofhepatoma.
5、Certainfoundationhasbeenestablishedinstudyingtheetiopathogenesisofhepatomaatthelevelofproteins,ass;tumorcells,.freelRNA的水平并不能真正代表所表达的蛋白质水平,因此,要求对生物功能的执行者蛋白质进行研究.蛋白质组是指一个基因组、一个细胞或组织或一种生物体所表达的全部蛋白质[1].蛋白质组学(Proteomics)是蛋白质组概念的延伸,是在整体水平上研究细胞内蛋白质组成及其活动规律的学科.蛋白质组学技术为研究肿瘤
6、标志物与肿瘤进展转移研究提供良好的技术平台,为研究开辟了新的手段和视角.SELDI蛋白质芯片技术是近年来新兴的一种蛋白质组学技术,它具有简单、快捷、灵敏等特点,可以检测分子量在Mr500~500000之间的蛋白或多肽,而且所需样本体积小(0.5~400μL)[2-3].我们应用细胞裂解液裂解体外培养的3种细胞(LO2,HepG2,HepG2.2.15),进行了表面增强激光解吸/离子化/飞行时间质谱技术(SELDITOFMS)分析,初步建立了正常肝细胞、肝癌细胞与转染乙肝病毒的肝癌细胞的蛋白表达图谱[4],发现了一系列(信噪比)
7、差异表达的蛋白,为今后从血清或肝癌组织中筛选标志蛋白提供科学依据.1材料与方法1.1材料正常肝细胞株(LO2)购自中科院上海细胞库;肝癌细胞株(HepG2)及携带乙肝病毒的肝癌细胞株(HepG2.2.15)由第四军医大学吴力克主任医师赠送.HPLC水,乙晴,三氟乙酸,白芥子酸(SPA),TritonX100,尿素,4羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES),表面活性剂(CHAPS)均购自美国Sigma公司,蛋白质芯片时间质谱分析仪(PBSⅡC)及(SPA中加入75μL乙氰和75μL10mL/L三氟乙酸)重复1次.干燥后用蛋白质芯片阅读机
8、进行质谱分析.1.2.3数据采集和结果分析用加有Allinone标准分子量蛋白的NP20芯片校正质谱仪,仪器参数设置如下:激光强度220,检测敏感度10,优化分子质量范围为Mr2000~10000,最高分子量为Mr50000,采用CiphergenProteinChip3.0