白头翁对体外培养阴道毛滴虫蛋白质差异表达的影响

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1、白头翁对体外培养阴道毛滴虫蛋白质差异表达的影响：张琼，黄慧聪，梁韶晖，潘长旺【摘要】目的：寻找阴道毛滴虫的特异蛋白质并探讨白头翁对其蛋白质差异表达的影响。方法：用固相pH梯度二维凝胶电泳分离阴道毛滴虫总蛋白，凝胶用银染显色，PDQuest7.4.0软件分析。结果：正常对照组找到蛋白质点平均（435±17）个，匹配率为92.5%；白头翁组找到蛋白质点平均（343±9）个，匹配率为94.9%。定性分析，正常组和白头翁组共有58个表达差异点，其中只在正常组中表达的点有45个，只在白头翁组表达的点有13个；定量分析，白头翁组和正常组比较，表达增加大于2倍的点有43个，降低50%以上的点有50个

2、。结论：建立了阴道毛滴虫正常组和白头翁组的二维凝胶电泳图谱，识别了151个差异表达的蛋白质，白头翁杀灭阴道毛滴虫的过程中上述蛋白质发生了质或量的改变。【关键词】阴道毛滴虫；白头翁；蛋白质组；二维电泳　　Abstract:Objective:TosearchthecharacteristicproteinsofTrichomonasvaginalis（T.v）andexploretheinfluenceofPulsatillachinensisondiscrepancyproteinexpression.Methods:TheproteinsofT.vmobilizedpHgradien

3、t-basedtensionalgelelectrophoresis(2-DE).Aftersilverstaining，PDQuest7.4.0softages.Results:About435±17and343±9proteinspotsapsofnormalgroupandPulsatillachinensisgroup，respectively：ThematchratioalgroupandPulsatillachinensisgroupalgroup，13proteinalgroupalgroupandPulsatillachinensisgroupareestablishe

4、d，and151differentproteinsarefound.IntheprocessofPulsatillachinensiskillsT.v，thequalitativeorquantitativechangetakesplaceintheabove-mentionedprotein.　　Keyonasvaginalis；Pulsatillachinensis；proteome；tensionalelectrophoresis　　阴道毛滴虫(TrichomonasvaginalisDonne，1837)是一种寄生于男女泌尿、生殖道的鞭毛虫，可引起滴虫性阴道炎、前列腺炎和泌尿系

5、统炎症[1]。滴虫病被认为是最流行的性传播疾病（STD）之一[2-5]。研究表明，白头翁具有明显的杀灭阴道毛滴虫作用，0.625～5mg/mL浓度的药物对滴虫均具有抑制、杀灭和裂解作用[6]，但药物杀虫机制中对虫体蛋白质组表达的影响尚未见报道。阴道毛滴虫全基因组序列已于2007年公布。目前，国外关于阴道毛滴虫全虫可溶性蛋白的二维电泳图谱已有报道[7]，而用药前后的差异蛋白质组学研究尚未见报道。本研究采用二维电泳技术，比较正常死亡组和白头翁作用死亡组阴道毛滴虫蛋白质表达的差异，为从蛋白质水平初步探索白头翁体外抗阴道毛滴虫的杀虫机制奠定基1材料和方法　　1.1试剂　　丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰

6、胺、超纯尿素(ultraurea)、硫脲(thiourea)、3-[3-(胆酰胺基丙基)二甲氨基]丙磺酸盐(CHAPS)、四甲基乙二胺(TEMED)、二硫苏糖醇(DTT)、碘乙酰氨、固相pH干胶条(17cm，pH4～7)、Bio-lytepH3～10、2-Dcleanup试剂盒等(Bio-Rad公司)；蛋白酶抑制剂混合液(Sigma公司)；所有溶液均用MilliQ水配制。　　1.2仪器设备　　PROTEANIEFCELL等电聚焦仪，PROTEANIIXi垂直板电泳仪及其附件，GS-800扫描成像系统，PDQuest凝胶图像分析软件(Bio-Rad公司)，UV722s紫外可见分光光度计(

7、上海精密科学仪器有限公司)。　　1.3虫体的收集　　1.3.1实验标本：虫体分离自温州东方女子医院阴道炎患者的阴道分泌物，参照文献[8]方法接种于肝浸汤培养基（pH5.8），37℃无菌培养，24h传代一次。　　1.3.2药物制备：白头翁20g(购自温州医学院附属第一医院)，置400mL双蒸水中，浸泡过夜，然后煮沸30min，收集药液；再加水200mL，继续煮沸30min，取出药液并与首次药液混合，过滤除去残渣，加热浓缩至40mL，药液生药浓度为