雌二醇鼻腔喷雾剂大鼠体内的药动学研究论文

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1、雌二醇鼻腔喷雾剂大鼠体内的药动学研究论文【摘要】目的对雌二醇鼻腔喷雾剂大鼠体内药动学进行研究。方法对大鼠鼻腔给予雌二醇随机甲基化β环糊精包合物的生理盐水溶液、雌二醇乙醇溶液和3种剂量的雌二醇鼻腔喷雾剂，用非隔室模型统计矩法进行了药物动力学研究，并与静脉注射雌二醇相比较计算绝对生物利用度。结果雌二醇鼻腔喷雾剂三剂量给药组，雌二醇包合物生理盐水溶液和雌二醇乙醇溶液剂给药组的Tmax分别为30、25、13、20和5min，Cmax分别为72.41、74.72、259.21、20.51和60.65ng·mL-1，MRT分别为69.60、146.52、740.65、1

2、30.55和16.68min。3个剂量组的雌二醇鼻腔喷雾剂的绝对生物利用度分别为86.87％、65.83％和48.99％，雌二醇包合物溶液组和雌二醇乙醇溶液剂组的绝对生物利用度分别为56.44％和24.38％。结论雌二醇鼻腔喷雾剂0.16和0.48mg·kg-1剂量组的绝对生物利用度均高于单独鼻腔给予雌二醇环糊精包合物溶液和雌二醇乙醇溶液组。【关键词】雌二醇鼻腔喷雾剂随机甲基化β环糊精药动学雌二醇（Estradiol,E2）是内源性最强的雌激素，临床上用于改善更年期症状.freellymethylatedβcyclodextrin,RAMEB,德国瓦克公司）；

3、壳聚糖（大连鑫蝶甲壳素有限公司）；对羟基苯甲酸乙酯（沈阳市东兴试剂厂）；苯扎氯铵（Sigma公司）；甲醇（色谱纯，天津康科德试剂公司）；其他试剂均为分析纯。1．3动物EB以1∶1的摩尔比制备包合物，壳聚糖的用量为1％，苯扎氯铵的用量为0.01％，氯化钠调节等渗，pH值在4.0～6.0之间。2．1．2E2RAMEB包合物溶液的制备称取适量的E2RAMEB包合物溶解于生理盐水中，氯化钠调节等渗，即得。2．1．3E270％乙醇溶液的制备称取E2原料药适量，将其溶于70％乙醇中即得。2．1．4E2注射剂的制备称取适量的E2，将其溶解于注射用水配制的0.01％（质量浓

4、度）RAMEB溶液中，即得。2．2给药剂量的确定按体表散热量折算，250g大鼠的剂量为60kg人用剂量的0.025倍，再根据鼻腔给药和静脉注射给药的差异性及在测定过程中的准确性，确定雌二醇鼻腔喷雾剂的给药剂量分别为0.16、0.48和1.60mg·kg-1，E2RAMEB包合物生理盐水溶液、雌二醇乙醇溶液剂和静脉注射给药的剂量均为0.16mg·kg-1。2．3给药方法及血浆样品的采集2．3．1鼻腔给药方法及血浆样品的采集取雄性SD大鼠，体质量200～250g，腹腔注射1.2g·kg-1的乌拉坦使大鼠麻醉，固定，打开颈部，暴露气管与食管，取一段聚乙烯管插入气管以

5、维持呼吸。再在颈总静脉上插管供取血用。用微量注射器前接一柔软PE管插入大鼠鼻孔约5mm，缓慢滴入药液。给药后立即结扎食管以防药液从鼻腔流失。给药后取血时间点为5、10、20、30、45、60、90、120、150、180min，每次取血0.4mL，8000r·min-1离心15min，取出上层血浆，－20℃冷冻保存。2．3．2静脉给药方法及血浆样品的采集大鼠麻醉，剪开一侧腹股沟皮肤，暴露浅表股静脉，分离覆盖黏膜层，左手食指按住股静脉近心端，待股静脉充盈后，1mL注射器配4号针头，以30°角进行静脉穿刺，推注药液无阻力感，表明针头在血管中，继续缓慢推完药液，给药完

6、毕后用干棉球压迫止血。眼眶取血。给药后取血时间点为5、10、20、30、45、60、90min，每次取血0.4mL，8000r·min-1离心15min，取出上层血浆，－20℃冷冻保存。2．4RPHPLC荧光法测定血浆中E2的浓度［5，6］2．4．1色谱条件色谱柱为KromasilODSC18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm,Zirchrom）；流动相为乙腈水（体积比40∶60），流速为1mL·min-1；荧光的激发波长为267nm，发射波长为302nm；检测温度为30℃。2．4．2内标溶液的配制精密称取对羟基苯甲酸乙酯50mg，置50μL量瓶中，加甲

7、醇溶解并定容至刻度，得内标储备液。用甲醇稀释为12.5μg·mL-1的内标溶液。2．5血浆样品处理和测定方法取全血约0.5mL，于8000r·min-1离心10min，精密量取血浆0.2μL，置刻度具塞试管中，用微量进样器加内标溶液5μL，旋涡振荡2min，再加入5mL乙醚，旋涡振荡5min，于3000r·min-1离心5min，吸取上层乙醚，40℃用氮气吹干，然后加入200μL甲醇溶解，每次进样50μL。以E2和内标峰面积比R＝As／Ai（As为E2峰面积，Ai为内标峰面积）为定量依据，计算样品中E2的含量。2．6样品稳定性试验取大鼠空白血浆200μL，配制E

8、2低、中、高3个浓度（浓