cd14基因启动子多态性与冠心病的关系论文

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1、CD14基因启动子多态性与冠心病的关系论文韦叶生，刘运广，唐任光，蓝景生【关键词】冠状动脉疾病Associationbetoterregionpolymorphismsandcoronaryheartdisease【Abstract】AIM:TostudytheallelefrequenciesandgenotypedistributionofCD14genepromoterregion-159C/T,-260C/TpolymorphismsinChinesepatientslevelsandgenotypesofCD14an

2、dCHD.METHODS：ThepolymorphismsofCD14geneerasechainreactionrestrictionfragmentlengthpolymorphism(PCRRFLP)methodsin246patientslevelsofCD14inedbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA).RESULTS：TheCHDgroupsholevelsofCD14thancontrolgroup(P0.01);ThedistributionofCD14gene-159

3、C/TpolymorphismorphismesashighasthatinCallelecarriers(OR=1.417，95%CI：1.106-1.816）,andtheserumlevelofCD14inTallelecarriersoterregion-260C/TpolymorphismisassociatedaybeariskfactorforCHD;soTallelecarriershaveahigherriskforCHDbyincreasingtheCD14expression.【Keyorphism【摘要

4、】目的：研究白细胞分化抗原14(CD14)基因启动子159C/T，260C/T多态性各等位基因及基因型在冠心病患者中的分布频率，分析CD14基因型及血清CD14水平与冠心病的相关性.方法：采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)技术，检测246例冠心病患者及258名正常人对照组CD14的基因多态性.freelmol/LdNTPs4.0μL，上、下游引物各40pmol/L，模板DNA10.0μL，TaqDNA聚合酶2.5U，不足体积用灭菌双蒸水补足至50μL.置热循环仪(TC48/H型)中94℃预变性3min；再按

5、下列程序循环35次，即94℃变性45s，59℃退火1min，72℃延伸1min；末次循环后，72℃延伸5min.分别取PCR扩增产物10μL，用5U限制性内切酶AvaII酶切CD14基因159位点，37℃孵育2h；用5U限制性内切酶HaeIII酶切CD14基因260位点，37℃孵育3h，反应终止后，消化片段分别在20和25g/L琼脂糖凝胶上电泳，EB染色，染色后经紫外灯判断结果并拍照.采用ELISA测定可溶性CD14(sCD14)的血清水平，每次测定均严格按说明书操作.酶法测定血清总胆固醇（TC）和甘油三酯(TG)；遮蔽法直接

6、测定高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)；apoAI，apoB用双波长免疫透射比浊法测定.以上测定均在7060型(日本产)全自动生化分析仪上进行，每次测定均选用高、中、低3种质控样品进行质控，以上项目检测质控均符合英国RIQAS国际质控标准.统计学处理：用SPSS10.0软件包进行分析.基因型和等位基因频率采用基因直接计数法计算，各组间基因型及等位基因频率比较采用χ2检验，并以比值比（OR）及其95%可信区间（95%CI）估计相对危险度.计量资料用x±s或Md（QR）表示，各组间指标比较依据指标性质，

7、用t检验、非参数秩和检验.P0.05为差异有统计学意义.2结果2.1CD14基因型分析CD14基因159C/T多态性，PCR扩增产物片段大小为497bp，根据限制性内切酶AvaII酶切片段的情况，基因型有3种，CC型（497bp1条带），CT型（497bp，353bp，144bp3条带），TT型（353bp，144bp2条带）；CD14基因-260C/T多态性，PCR扩增产物片段大小为268bp，根据限制性内切酶HaeIII酶切片段的情况，基因型有3种，CC型（159bp，109bp2条带），CT型（268bp，159bp，1

8、09bp3条带），TT型（268bp1条带）（图1，2）.1~3：CC基因型；4,5,7：TT基因型；6：CT基因型;M：DL2000marker分子量标准.图1CD14基因159位点基因型电泳（略）1,5：TT基因型；2,4：CT基因型；3：CC基因型;M：DL2000ma