肠内营养对梗阻性黄疸幼鼠肠黏膜bax、bcl2蛋白表达的影响及意义论文

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1、肠内营养对梗阻性黄疸幼鼠肠黏膜Bax、Bcl2蛋白表达的影响及意义论文胡凤爱张帆赵冬梅张璐萍刘烨辉傅廷亮【摘要】目的探讨肠内营养对梗阻性黄疸幼鼠肠黏膜中Bax、Bcl2表达的影响及意义。方法将40只)仅做胆总管游离，但不结扎。OJ组术后2d经采血检查总胆红素和直接胆红素，比正常对照高5倍为模型制作成功的标准。模型制作成功后将大鼠置于室温22～26℃、相对湿度40%～70%、安静、通风的环境中分笼喂养,动物给予普通饲料喂养，实验过程中所有大鼠均予自由饮水。模型制作成功后假手术组和OJ组分别于10d结束实验。OJ+能全素喂养组术后给予能全素，配制成4.184kJ/ml，能量610kJ/(kg·

2、d)，含氮量1.0g/(kg·d)，OJ后1d摄入标准量的1/3，第2天摄1/2，第3天起摄入全量。每天计划量分4～6次给予。1.3观察指标及测定方法1.3.1肠黏膜形态学分析：大鼠处死后，切取距回盲部5cm处一段长3cm的小肠，置10%中性甲醛中固定24h后，石蜡包埋，切片厚6μm，苏木精伊红染色。每标本取5张不连续的切片，每张切片顺次取奇数视野用显微观测尺在光镜下测定绒毛高度和黏膜厚度。1.3.2Bax、Bcl2的免疫组化检测：参照免疫组化试剂盒说明进行。结果判断：细胞质出现棕黄色颗粒为阳性表达细胞，无棕黄色颗粒为阴性表达细胞。每个切片选取细胞分布均匀的5个高倍(×400)视野(向同

3、一方向移动切片，不重复，不重叠)作为观察区，分别计数每个视野中的阴性与阳性细胞数。1.4统计学处理计量资料以x±s表示，多组均数比较用单因素方差分析，多个样本均数的两两比较(三个手术组与对照组)用Dunt法，统计学软件SPSS13.0。2结果2.1各组实验鼠存活情况OJ组实验鼠分别于术后1d、3d、7d各死亡1只。OJ+能全素组实验鼠术后2d、3d和5d各死亡1只。死亡原因为术后胃扩张、肠麻痹、肠粘连。OJ组术后9d死亡1只，为胆道穿孔所致腹腔感染。大鼠于术后1～2h恢复活动，胆总管结扎术后第48h，OJ组和OJ+能全素组均出现黄色尿液，且有加重趋势，并于术后3d出现皮肤黄染。OJ组大鼠5d

4、内即出现明显肠管扩张、肠壁变薄等现象，普遍活动减少，食欲较差。2.2肠黏膜形态学改变正常对照组和假手术组实验鼠回肠黏膜绒毛结构完整，上皮细胞成高柱状，无间质水肿和中性粒细胞浸润。OJ实验模型的回肠黏膜绒毛间隙增大，黏膜腺体排列稀疏，杯状细胞减少，黏膜萎缩变薄。OJ组大鼠回肠绒毛的高度和黏膜厚度明显低于正常对照组、假手术组、OJ+能全素组。OJ+能全素组与正常对照组和假手术组比较，差异无显著性意义(结果另文报道)。2.3Bax、Bcl2在肠黏膜上皮的表达Bax和Bcl2在各实验组均有不同程度的表达(见图1～6)，表达的部位在细胞质，正常对照组和假手术组可见较多Bcl2阳性细胞表达，Bax

5、仅有少量表达。各组大鼠肠黏膜Bcl2、Bax阳性细胞数的百分率比较，经方差分析各组均数间差别有统计学意义(F=13.46,P0.01)。进一步两两比较，假手术组和OJ+能全素组与正常对照组均没有差别，OJ组Bcl2、Bax阳性细胞数高于正常对照组(P0.01);OJ+能全素组高于OJ组(P0.05)，详见表1。表1各组大鼠回肠黏膜Bcl2、Bax阳性细胞数的百分率比较3讨论本研究观察到幼鼠胆总管结扎后随着胆红素值的逐渐升高，出现明显肠管扩张、肠壁肌层变薄等现象，组织学检查发现胆道梗阻10d时肠黏膜厚度和绒毛高度明显减低，说明高胆红素可以引起肠黏膜损害;OJ组肠黏膜凋亡细胞增加，说明高胆

6、红素可引起肠黏膜细胞发生凋亡。正常小肠黏膜上皮是一种动态的上皮，每3～8d更新一次，其本身就存在自发性的凋亡，籍以清除衰老的细胞。其屏障功能的完整性和内环境的稳定主要依赖于肠黏膜细胞凋亡和增殖之间的相互平衡。细胞凋亡是一种细胞在局部环境生理性或病理性刺激下引起的非炎症性死亡，是介于正常与坏死之间的一种病理过程。细胞凋亡与坏死有本质的不同，凋亡是一个有基因表达的主动死亡过程。有研究者3将凋亡发生过程分为四个步骤：即诱导凋亡刺激信号的出现、凋亡诱导阶段、凋亡执行阶段和细胞死亡后解体阶段。而Bcl2/Bax基因主要在凋亡执行阶段发挥作用。Bax和Bcl2基因是目前最受关注的与细胞凋亡相关的基因

7、，Bax基因与Bcl2基因同源，二者可形成异二聚体或Bax与自身形成二聚体，通过转基因动物和基因转染实验研究发现，Bcl2对细胞凋亡具有明显的抑制作用，而Bax拮抗Bcl2，促进细胞凋亡4。因此Bcl2与Bax的比例决定着细胞受凋亡因素刺激后的生存与凋亡5。本研究免疫组织化学检测OJ组大鼠肠黏膜上皮细胞Bcl2表达降低，Bax表达升高，Bcl2/Bax比值下降，肠黏膜细胞凋亡增加。毛晓光等6研究发