大豆异黄酮苷元检测方法的研究论文

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1、大豆异黄酮苷元检测方法的研究论文张磊,金桂芳,杨红,习志刚【摘要】目的建立大豆异黄酮苷元含量测定方法。方法采用HPLC法，DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm,5μm)，流动相：甲醇-0.3%磷酸溶液（体积比48∶52），流速0.7mL/min，测定波长260nm,柱温25℃。结果制备的大豆异黄酮苷元总含量为70.98%;大豆苷元、黄豆黄素和染料木素平均回收率分别为98.7%、98.9%和99.2%，RSD分别为2.1%、1.6%和1.4%。结论所建立的测定方法重现性好、可靠，可用于3种大豆

2、异黄酮苷元的含量测定。【关键词】大豆异黄酮苷元；高效液相色谱法；含量测定Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthecontentdeterminationofisoflavoneaglycones.MethodsIsoflavoneaglyconesonsilC18column(250mm×4.6mm，5μm).AmixtureofMeOH-0.3%H3PO4（48∶52)obilephaseL/min.Thedetectingat25℃.Results

3、Thecontentofisoflavoneaglyconesinthesampleethodcanbeusedforthequalitycontrolofsoyisoflavoneaglycones.KeyL）体积分数为70％的乙醇溶液浸泡30min，80℃水浴回流提取2次，每次90min；合并提取液，过滤后回收乙醇、浓缩；上AB-8大孔树脂,以体积分数为50％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，45℃烘干。适量乙醇溶液溶解，拌样上聚酰胺柱，以体积分数为70％的乙醇溶液洗脱，得粗提浸膏，45℃烘干。取一定

4、量的粗提物置于圆底烧瓶中，加入4倍量（g/mL）的7%盐酸-乙醇液，80℃水浴水解2h，浓缩，乙醚萃取，挥干乙醚；用适量体积分数为70％的乙醇溶液溶解，石油醚脱脂，用200～300目硅胶拌匀，自然干燥，上硅胶柱，用三氯甲烷-甲醇（体积比6∶1）洗脱，收集洗脱液，挥去溶剂，得大豆异黄酮苷元混合物［3,4］。2.2样品溶液的制备精密称取大豆异黄酮苷元混合物28.50mg，置50mL量瓶中，加甲醇超声溶解，定容，精密吸取1.0mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得质量浓度为0.0570mg/mL的样品溶液

5、。2.3对照品溶液的制备分别精密称定大豆苷元、染料木素对照品13.20mg、14.60mg各置50mL量瓶中，加甲醇超声溶解，定容，得浓度为0.2640mg/mL的大豆苷元及0.2920mg/mL的染料木素对照品溶液；精密称定黄豆黄素27.75mg，置50mL量瓶中，加甲醇超声溶解，定容，精密吸取1.0mL，至5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得0.1110mg/mL的黄豆黄素对照品溶液。4℃储存备用。2.4色谱条件［5～6］DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；柱温25℃；流动

6、相：甲醇-0.3%磷酸溶液（体积比48∶52）；流速=0.7mL/min；测定波长260nm；进样量：20μL。2.5线性关系分别精密吸取上述大豆苷元、染料木素、黄豆黄素对照品溶液0.8、1.5、0.6mL置100mL量瓶中，甲醇定容，得混合对照品溶液Ⅰ。同法制备混合对照品溶液Ⅱ-Ⅵ，浓度见表1，混合对照品HPLC色谱图见图1。表1混合对照品溶液中大豆苷元、黄豆黄素、染料木素的质量浓度（略）Tab.1Contentsofgenistein,daidzeinandglyciteininthecontrols

7、ampleρ/按上述色谱条件依法测定，分别以大豆苷元、黄豆黄素和染料木素的浓度(μg/mL)对峰面积作回归计算,得回归方程（n＝6）分别为：y=5836.1x+0.8812，r=0.9994；y=1177.4x+0.1372，r=0.9994；y=3256.6x+0.894，r=0.9992。大豆苷元、黄豆黄素和染料木素分别在2.112～21.12μg/mL，0.6660～6.660μg/mL,4.380～43.80μg/mL范围内，线性关系良好。1.大豆苷元2.黄豆黄素3.染料木素图1对照品HPLC色谱

8、图（略）Fig.1HPLCchromatogramofreferencesubstance2.6精密度试验取对照品溶液Ⅲ，重复进样6次，记录色谱图，测定峰面积值，计算RSD值，得大豆苷元、黄豆黄素和染料木素的RSD分别为0.5９%、0.6２%和0.8３%。2.7重复性试验取同一批次大豆异黄酮苷元混合物6份，按“2.2”项下，制备样品溶液，测定峰面积值，计算RSD值，得大豆苷元、黄豆黄素和染料木素的RSD分别为2.0%，1.2%