亚洲带绦虫膜联蛋白b2基因的表达、纯化及免疫学分析论文

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1、亚洲带绦虫膜联蛋白B2基因的表达、纯化及免疫学分析论文白婧，李亚军，谢鹏，牟军【摘要】目的对亚洲带绦虫膜联蛋白B2(AnnexinsB2)进行克隆表达及免疫学初步研究。方法利用在线生物信息学工具从亚洲带绦虫成虫cDNA文库中筛选出AnnexinsB2基因，并将该基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中，在大肠埃希菌BL21/DE3中诱导表达，表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定，重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化.freeledasAnnexinsB2ofTaeniasagi

2、nataasiticasoastoanalyzetheimmunogenicityofitsrebinantprotein.MethodsByonlineanalysisofthegeneatbioinfomaticstheTaeniasaginataasiaticafull-lengthcDNAplasmidlibrary,thegeneedtoE.coliBL21atography.Inaddition,theimmunoreactivityofthepurifiedrebinantproteinsonstrat

3、edbyPCR,doubleenzymedigestionandDNAsequencingindicatedthattherebinantplasmid.ConclusionTheAnnexinsB2ofTaeniasaginataasiticahasbeenclonedandexpressedintheprokaryoticexpressionsystemandthepurifiedproteinhasbeenconfirmedmunogenicity.KEY1：DNA标准(DL2000);1：PCR产物;2：pE

4、T-28a(+)质粒双酶切;3：pET-28a(+)-AnnexinsB2重组质粒双酶切;M2：DNA标准(DL15000)。图2100g/LSDS-PAGE分析pET-28a(+)-TaAnnexinsB2在大肠埃希菌中的表达产物及其纯化产物Fig.2100g/LSDS-PAGEanalysisoftheprokaryoticexpressionproductandpurifiedproductM：蛋白Marker;1：pET-28a(+)IPTG未诱导;2：pET-28a(+)IPTG诱导;3：pET-28a(+

5、)-AnnexinsB2IPTG未诱导;4：pET-28a(+)-AnnexinsB2IPTG诱导;5：pET-28a(+)-AnnexinsB2上清;6：pET-28a(+)-AnnexinsB2沉淀;7：pET-28a(+)-AnnexinsB2纯化蛋白。3讨论带绦虫病的流行在我国西部一直是一个严重的公共卫生问题。每年由带绦虫病造成的健康和畜牧业经济损失上百亿，严重影响西部欠发达地区的社会发展。目前，亚洲带绦虫病的防治研究的重点集中在诊断和疫苗候选抗原、药物靶标、致病的分子机制研究。图3重组蛋白的：蛋白Marke

6、r;1：纯化蛋白与亚洲带绦虫患者血清的反应结果;2：纯化蛋白与牛带绦虫患者血清的反应结果;3：纯化蛋白与猪带患者血清的反应结果;4：纯化蛋白与亚洲带绦虫感染猪血清的反应结果;5：纯化蛋白与正常人血清的反应结果。本实验通过生物信息学方法从已经构建好的亚洲带绦虫成虫cDNA质粒文库中筛选出了一个膜联蛋白(AnnexinsB2)的同源基因，并且预测出该基因位于胞浆，无跨膜区，二级结构基本上是以α螺旋为主。这些都符合膜联蛋白家族的共同特征4。根据膜联蛋白家族分布广泛，表达丰富且稳定的特性，可以推测其在绦虫的生理活动中可能起着

7、重要的作用。膜联蛋白是一个广泛存在的蛋白家族，在所有真核基因组中广泛表达。具有内部重复单位和“G-X-G-T-(38residues)-D/E”基序5，即Ca2+结合区域的特征，用以结合带有负电的脂质。虽然它为钙结合蛋白，但是在结构上却没有EF手，而且在和Ca2+结合后，还可以与磷脂再次结合而发挥生物学效应。例如，细胞的胞吞胞吐，离子通道的形成，调节磷脂酶A2的活性及细胞内外Ca2+浓度、抗炎症反应等。在长期的生物进化过程中，膜联蛋白家族各成员在生物学特性和生理功能方面表现出非常复杂的关系，且在研究过程中发现，ann

8、exins没有信号肽，没有跨膜结构，是一个典型的细胞内蛋白。但是，却有学者发现它可以与细胞外基质发生作用。例如，抗炎6、抗凝7、抑制肿瘤8等。最新的研究报道，当将其作为疫苗的候选因子时，可以消除一些寄生于哺乳动物体内的寄生虫。此外，学者们认为膜联蛋白是维持细胞膜表面结构和信号转导功能的重要蛋白。并可能具有激活纤维蛋白酶原的功能，有助于破坏宿主的