三种人体带绦虫成虫gst基因序列分析及牛带绦虫成虫gst基因的克隆、表达和免疫学分析

《三种人体带绦虫成虫gst基因序列分析及牛带绦虫成虫gst基因的克隆、表达和免疫学分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、《中国图书资料分类法》单位代码：10660分类号：R384学号：T10660S100002贵阳医学院2013届硕士学位论文三种人体带绦虫成虫GST基因序列分析及牛带绦虫成虫GST基因的克隆、表达和免疫学分析研究生：廖兴江导师：黄江教授年级：2010级专业：病原生物学2013年05月21日~1~目录摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„01前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„03第一部分三种人体带绦虫成虫GST基因序列分析„„„„„„05材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„05结果„„„„„„

2、„„„„„„„„„„„„„„„07第二部分牛带绦虫成虫GST基因的克隆表达和免疫学分析„„18材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„18结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„29讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„31结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„34参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„35英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„38主要英文缩写词„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„40致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„

3、„„41学位论文独创性声明„„„„„„„„„„„„„„„„„„„42综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„43附录„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„49~1~三种人体带绦虫成虫GST基因序列分析及牛带绦虫成虫GST基因的克隆、表达和免疫学分析专业：病原生物学研究生：廖兴江导师：黄江教授【摘要】目的从猪带绦虫（Taeniasolium）、牛带绦虫（Taeniasaginata）和亚洲带绦虫（Taeniaasiatica）成虫cDNA文库中识别出谷胱甘肽S-转移酶（glutathioneS-transfera

4、se，GST）基因，生物信息学分析预测三者编码蛋白的结构和功能。对牛带绦虫成虫GST(TasGST)进行克隆、表达和免疫学特性初步分析，为进一步研究三种人体带绦虫成虫GST在绦、囊虫病诊断和疫苗的应用价值提供实验依据。方法利用生物信息学方法从三种人体带绦虫成虫cDNA文库中识别出GST基因，利用美国国家生物技术信息中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统（ExPASY,http://ca.expasy.org/）中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析的各种工具，结合

5、其它生物信息学分析软件包（如Pcgene和VectorNTIsuite等）分析、预测三者基因编码蛋白质的理化特性、翻译后的修饰位点、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象等，预测三者编码蛋白的结构和功能。将TasGST克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中，在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化蛋白免疫SD大鼠制备免疫血清，用WesternBlotting方法分析重组蛋白的免疫原性和免疫反应性。结果三者

6、序列都包含完整开放阅读框，为GST的全长基因，推导出的氨基酸序列与GenBank中其它绦虫GST氨基酸序列的一致性均超过85%。三者编码的蛋白在氨基酸数目、蛋白理化性质、活性位点的B细胞线性表位、亚细胞定位等方面存在一定差异。将预测的线性表位标注在三种人体带绦虫成虫GST三维结构的表面，结果显示三种带绦虫的主要线性表位在空间结构上处于相距较远的分子表面。三种人体带绦虫成虫与其它物种GST氨基酸序列构建进化树结果显示，三者的亲缘关系接近。对TasGST基因进行克隆、表达，双酶切及测序结果均表明重组质粒pET-28a(+)-TasGST构建

7、成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠杆~1~菌BL-21/DE3中获得可溶性表达，经亲和层析获得了纯化蛋白。TasGST重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别，具有免疫原性；TasGST重组蛋白可被感染囊尾蚴的牛血清和牛带绦虫患者血清识别，具免疫反应性。结论利用生物信息学对三种人体带绦虫的GST基因进行了比对研究。对TasGST基因进行克隆、表达并纯化，重组蛋白具有免疫原性和免疫反应性，为展开对三种人体带绦虫GST的后续研究奠定了基础。【关键词】猪带绦虫；牛带绦虫；亚洲带绦虫；谷胱甘肽S-转移酶；克隆表达~2~前言猪带绦虫（Tae

8、niasolium）、牛带绦虫（Taeniasaginata）和亚洲带绦虫（Taeniaasiatica）是常见的人兽共患寄生虫，人是这三种带绦虫唯一的终宿主，牛或猪是其主要的中间宿主，猪带绦虫感染人也可引