谷胱甘肽s 转移酶m1 基因缺失与老年性白内障发病关系的研究

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1、谷胱甘肽S转移酶M1基因缺失与老年性白内障发病关系的研究闫吉田杰沈阳市第四人民医院检验科，辽宁沈阳110031[摘要]目的通过检测谷胱甘肽S转移酶M1（glutathioneS-transferaseM1,GSTM1）的基因缺失，探讨其与老年性白内障发病关系。方法对105例老年性白内障患者和60例健康人利用聚合酶链反应(PCR)测定外周血的GSTM1基因；白内障患者组同时取白内障晶状体囊膜上皮细胞进行GSTM1基因检测。结果白内障患者GSTM1基因缺失率达64.8％，显著高于对照组的48.3％（P<0

2、.05）；外周血单个核细胞GSTM1基因缺失率64.8％，晶状体囊膜上皮细胞GSTM1基因缺失率66.7％，二者之间差异无统计学意义（P>0.05）。结论GSTM1基因缺失者患白内障的危险性高于GSTM1基因携带者，提示GSTM1基因缺失很可能是老年人易患白内障的遗传因素之一。.jyqkL静脉血（EDTA-K2抗凝），与等量Hankacute;s液混和后2000rpm离心20m，提取单个核细胞加入５倍体积Hankacute;s液，1500rpm离心10m，洗涤两次后离心弃上清-80℃保存。提取RNA：

3、将晶体囊膜及血细胞标本复融致室温，加入1mLTrizol液混匀（晶体囊膜要磨碎）放置10m；加入200uL氯仿混匀10m；4℃13000rpm离心15m取上层液移入另一离心管，加入等体积异丙醇混匀10m；4℃13000rpm离心15m吸弃上清加入1mL75％的乙醇清洗，4℃8000rpm离心10m吸弃上清，重复一遍后干燥5m加入适量DEPC水待用。合成c-DNA及GSTM1测定：逆转录试剂及引物均来自广州达安基因生物技术公司。采用ROCHLightCycler型实时荧光定量PCR仪，按试剂说明设定好参数后进

4、行c-DNA合成及GSTM1检测。1.3统计方法应用SPSS16.0软件对数据进行统计学分析，实验各组间GSTM1基因缺失率的比较均采用χ2检验，正态分布的资料采用均数±标准差（x±s）表示。2结果2.1白内障组与对照组的一般情况两组年龄、性别比较，二者差异无统计学意义（P>0.05），说明两组患者基本情况无差异。2.2白内障组与对照组的GSTM1基因缺失率比较白内障患者GSTM1基因缺失率显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。2.3白内障患者外周血单个核细胞与晶状体囊膜上皮

5、细胞GSTM1基因缺失率比较两组经比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表2。3讨论白内障的形成与自由基有关[10]，急剧的氧化应力导致细胞机能障碍，细胞代谢和一些外部因子均可使细胞形成自由基，这些自由基会毒害细胞，特别是富含不饱和脂肪酸的细胞膜对氧化反应最敏感。通常晶体本身有一个完善的抗氧化防御系统[11]，能有效地清除各种原因产生的自由基，其中还原型谷胱甘肽(GSH)是晶体中最重要的抗氧化剂之一含量较高，能捕捉晶体内产生的自由基，GSH解毒作用很大程度依赖GST同工酶的催化作用，GST同工酶中

6、GSTM1的基质特异性最强，随着年龄的老化GSTM1可能缺失，表现为GSTM1酶活性失活，使自由基与体内抗氧化系统之间失衡，产生氧化应力攻击细胞膜，使脂质过氧化、损伤DNA和胞内蛋白质，导致晶状体混浊形成白内障。徐美芳等[6]和皮静波等[12]等检测老年性白内障患者外周血中的GSTM1基因，结果显示老年性白内障的发病与GSTM1基因缺失密切相关。该研究显示白内障患者外周血中的GSTM1基因的缺失率为64.8%，对照组外周血中的GSTM1基因的缺失率为48.3%，白内障患者外周血中的GSTM1基因的缺失率显著

7、高于对照组(P<0.05),与徐美芳等[6]和皮静波等[12]研究结果相同，表明GSTM1基因缺失可能与老年性白内障发病相关；为了避免不同组织间GSTM1的差异，该研究对外周血单个核细胞和晶状体囊膜上皮细胞的GSTM1的基因缺失率进行了对比，二者分别为64.8%和66.7%，差异无统计学意义(P>0.05)，表明晶体上皮细胞与外周血单个核细胞中GSTM1基因具有一致性。即使晶体在胚胎发生、发育过程与周围环境隔绝，具有特殊性，但晶体上皮细胞DNA与外周血单个核细胞相同，可以适用于基因缺失率的比较。

8、综上，目前多数研究已经表明，老年性白内障与晶体的氧化损伤密切相关。特别是分子生物学技术的发展，能从基因缺失角度上解释白内障产生的原因。该研究发现，GSTM1基因缺失者患白内障的危险性高于GSTM1基因携带者，提示GSTM1基因缺失很可能是老年人易患白内障的遗传因素之一。随着研究的深入，可能更多白内障相关基因被逐渐发现，对于今后白内障的预防和治疗起到很大的帮助。.jyqkorphismandSusceptibili