垂体瘤转化基因在多发性骨髓瘤患者中表达的研究论文

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1、垂体瘤转化基因在多发性骨髓瘤患者中表达的研究论文王昭鹿全意陈萍张鹏丛雅琴【摘要】为了研究垂体瘤转化基因（pituitarytumor-transforminggene,PTTG）在老年多发性骨髓瘤（multiplemyeloma，MM）患者中的表达并分析它与MM发生的关系，采用RT-PCR方法检测33例MM患者及10例正常对照者骨髓单个核细胞中PTTG的表达。结果表明：MM患者PTTG在MM中的表达水平(0.3415±0.2172)明显高于正常对照组(0.0590±0.0233)(P0.05)。结论：PTTG的过度表达

2、可能与MM的发生发展有关，这为MM的发病机制及其基因靶向治疗的研究提供了新的思路。【关键词】垂体瘤转化基因多发性骨髓瘤逆转录聚合酶链反应垂体瘤ExpressionofPituitaryTumor-TransformingGeneinPatientsaAbstractToexploretheexpressionofpituitarytumor-transforminggene(PTTG)inelderlypatientsultiplemyeloma（MM）anditsrelationshipRNAarroononucle

3、arcells（BMMNC）from33patientsalcontrolsbyusingreversetranscriptase-polymerasechainreaction(RT-PCR).TheresultsshoRNAinMMpatients(0.3415±0.2172)alcontrols(0.0590±0.0233)(P＜0.05).ItisconcludedthattheoverexpressionofoncogenePTTGmayberelatedtogenesisandprogressionofMM

4、.Itprovidedaneor-transforminggene；multiplemyeloma;reversetranscription-polymerasechainreaction;pituitarytumor多发性骨髓瘤（MM）是一种浆细胞恶性增生性血液肿瘤，患者骨髓内有大量异常浆细胞增殖，血清中出现异常的单克隆免疫球蛋白。发病率占血液肿瘤的10％，中、老年人中发病率较高。新近报道的癌基因垂体瘤转化基因（pituitarytumor-transforminggene,PTTG），其高表达在促进细胞增殖、转化及

5、肿瘤发生中具有十分重要的作用,PTTG在恶性肿瘤中的高表达和转化能力证实了其与肿瘤的发生有关［1］。国内外已有报道PTTG在胃癌［2］和乳腺癌［3］等多种肿瘤中高表达.freela公司）由下列成分组成：GIT变性液（10ml），2mol/LNaOAc(pH4.0)(1ml)，MMLV逆转录酶200U/μl(20μl)，逆转录反应体系，TaqDNA聚合酶1U/μl(40μl)，PCR反应体系，去RNase水。水平电泳槽为北京六一试验仪器厂产品；PTC-150型PCR扩增仪为美国MJReseach公司产品；EC250-90

6、多功能电泳仪为美国EC公司产品；ZF-4型多功能紫外投射反射分析仪为上海长明光学电子仪器厂制造；1DImageAnalysisSoftl并将其注入EDTA抗凝试管中,加入4mlPBS(pH7.4)缓冲液稀释。采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离单个核细胞，-80℃保存备用。总RNA的提取采用异硫氰酸胍－苯酚－氯仿一步法提取细胞总RNA。所抽提总RNA经分光光度计测定260和280nm处吸光度（A）值，A260/A280值在1.85-1.98者用于RT-PCR。引物设计PTTG引物序列：P15'-CGATGCCCCACC

7、AGCCTTACC-3'，P25'-CAAGCTCTCTCTCCTCGTCAAGG-3'，扩增产物317bp；β-actin引物序列:P15'-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3'，P25'－CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3'，扩增产物539bp。引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。逆转录反应（RT）在经DEPC处理过的0.5mlEppendorf管中加入逆转录反应体系：细胞总RNA1μg,MMLV-RT（Moloneymurineleukemiavirusreversetrans

8、criptase,MMLVRT）1μl,dNTP1μl,DTT2μl,buffer4μl,下游引物1μl,.freellEppendorf管中加入PCR反应体系：dNTP1μl,buffer10μl,MgCl28μl,Taq酶2μl，上游引物P11μl，超纯水58μl。快速离心混匀；95℃5分钟，冰浴冷却,然后快速离心使蒸汽沉于管