超滤对当归多糖组分总糖含量和蛋白含量的影响论文

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1、超滤对当归多糖组分总糖含量和蛋白含量的影响论文刘新友，周四元，程建峰，张琰，刘琳娜，梅其炳【摘要】目的探讨超滤分离当归多糖组分的可行性及其对各组分总糖含量和蛋白含量的影响。方法新鲜岷县当归经80%无水乙醇回流除去脂溶性成分，水提醇沉提取当归粗多糖。将当归粗多糖用蒸馏水溶解，反复冻融除蛋白后.freelMin-xiancountyfluencedin80%ethanoltoremovethelipophilicfraction.Rudepolysaccharideined.ResultsThreefract

2、ionsolecularainponentofAngelicasinensispolysaccharideolecularainfractionofAngelicasinensispolysaccharideobtainedbyultrafiltrationhashighertotalsugarcontentandloination当归多糖是一种多组分多糖，分子量范围很广，因为药材产地、采集时间以及提取方法的不同其组成会有很大变化。现代药理学研究证实，当归多糖具有增强免疫［1］、提高造血功能［2］、保肝［

3、3］、抗肿瘤［4］、抗辐射损伤［5］及促进胃肠道黏膜上皮细胞的移行与增殖，拮抗泼尼松龙引起的外周血白细胞减少，加速胃肠道损伤黏膜修复等作用［6］，还能作为载体合成具有结肠靶向递药特性的地塞米松前体药［7］。但当归多糖常采用凝胶柱进行分离，效率低，成本高。本实验拟采用超滤分离当归多糖组分，并对各组分的总糖含量和蛋白含量进行分析。1材料与仪器甘肃岷县新鲜当归，于每年霜降后采收。无水乙醇，无水葡萄糖，浓硫酸，磷酸均为分析纯；重蒸苯酚（陕西建华生物有限公司）；Servablue-G-250染料（华美生物工程公司）

4、；牛血清白蛋白（BSA）（Sigma-Aldrich）。MM12型食品绞碎机（广东省韶关市食品机械厂），10L调温式电热套（北京科伟永兴仪器有限公司），RE52-05型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），CR21F型高速离心机（Hitachi），真空泵（河南巩义市英裕予华仪器厂），冷冻干燥机（FTSSystems），DU-800紫外分光光度计（Beckman），Pellicon标准超滤仪和Pellicon-2超滤膜包为Millipore公司生产。2方法与结果2.1当归药材的预处理岷县新鲜当归，清水洗净后，用

5、食品绞碎机绞碎，浸泡于无水乙醇中保存。取醇浸当归，以85%乙醇回流提取3次，2h/次。醇提当归渣自然晾干，备用。2.2当归总多糖的提取取处理后的干当归渣500g，加入20倍蒸馏水回流提取3次，时间分别为3，3，2h。合并3次提取液，60℃减压浓缩至5000ml，放冷，3000r/min离心10min，上清液继续浓缩至呈稠膏状，加入3倍量（体积）无水乙醇，边加边搅拌，静置自然沉淀。倾去上层乙醇液，余下部分以3000r/min离心10min，得到淡黄色的当归粗多糖。2.3反复冻融除蛋白取离心得到的当归粗多糖，

6、按湿重加入4倍量的蒸馏水溶解，于－20℃反复冻融8次，3000r/min离心20min除蛋白。2.4超滤分离当归多糖组分除蛋白后的当归多糖液加两倍量的蒸馏水稀释，用0.45μm的微孔滤膜过滤，以10kD的超滤膜透析除去小分子杂质，然后依次用300kD，100kD和30kD的超滤膜分离。将分离的组分液减压浓缩，冷冻干燥，得到分子量分别为10～30kD，30～300kD和300kD3个当归多糖组分。超滤得到的当归多糖组分，随分子量的增加，其颜色逐渐变浅；当归多糖中以大分子的当归多糖为主，其中分子量300kD组

7、分占当归干重的5.48%。结果见表1。表1当归多糖组分的性状及收率组分颜色收率（略）收率以所得多糖占干当归渣干重的百分比表示。2.5总糖含量测定方法采用改良的苯酚－硫酸法测定总糖含量［8］。重蒸苯酚用蒸馏水配成60g/L的溶液。精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖15mg，用蒸馏水定容至100ml，使成150μg/ml的葡萄糖储备液。2.5.1标准曲线制备分别精密量取葡萄糖储备液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7ml于10ml具塞圆底试管中，各加蒸馏水至1ml，振摇混匀，使成15.0

8、0，30.00，45.00，60.00，75.00，90.00，105.00μg/ml的葡萄糖标准工作液。于各管中分别加入60g/L的苯酚溶液0.6ml，浓硫酸3ml，漩涡振荡器振荡均匀，放置15min,于490nm处测定吸光度，每个浓度平行做3组，计算平均吸光度值。空白校正用蒸馏水1ml按上法平行操作。以测得的平均吸光度值(Y)对葡萄糖标准工作液的浓度（X，μg/ml）作线性回归，得测定总糖含量的标准曲线回归方程为Y=0.0